| 内容摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 CAR-T免疫疗法,治愈癌症不是梦 | 第10-13页 |
| 1.2 PD-1与PD-L1简介 | 第13-14页 |
| 1.3 RNA干扰与shRNA | 第14-16页 |
| 1.4 课题目标及思路 | 第16-18页 |
| 第二章 八种携带不同序列沉默PD-1基因的嵌合抗原受体质粒载体的构建 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料、仪器和试剂/试剂盒 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂/试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要培养基及液体试剂的配制 | 第19-21页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第21-28页 |
| 2.2.1 七组不同shRNA干扰序列及阴性对照序列的获得 | 第21-22页 |
| 2.2.2 七组干扰片段及阴性对照片段分别与表达载体的连接 | 第22-28页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第28-36页 |
| 2.3.1 表达载体pLV-CAR19-siRNA basic的双酶切电泳鉴定 | 第28页 |
| 2.3.2 八组干扰片段与表达载体连接后的菌落PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 八组重组质粒测序 | 第29-36页 |
| 第三章 慢病毒的包装及病毒滴度的测定 | 第36-51页 |
| 3.1 实验材料、仪器和试剂/试剂盒 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3.1.3 实验试剂/试剂盒 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第37-40页 |
| 3.2.1 慢病毒的包装(以病毒编号为LV-CAR19-1453的慢病毒为例) | 第37-38页 |
| 3.2.2 慢病毒的浓缩与纯化(以病毒编号为LV-CAR19-1453的慢病毒为例) | 第38页 |
| 3.2.3 病毒滴度的测定(以病毒编号为LV-CAR19-1453的慢病毒为例) | 第38-40页 |
| 3.2.4 其余七组慢病毒的制备 | 第40页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第40-51页 |
| 3.3.1 三质粒系统共转染细胞 | 第40-41页 |
| 3.3.2 慢病毒感染293T细胞 | 第41-49页 |
| 3.3.3 病毒滴度测定 | 第49-51页 |
| 第四章 沉默T细胞PD-1基因效果最佳慢病毒的筛选 | 第51-65页 |
| 4.1 实验材料、仪器和试剂/试剂盒 | 第51页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第51页 |
| 4.1.3 实验试剂/试剂盒 | 第51页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第51-59页 |
| 4.2.1 刺激Jurkat细胞表面PD-1表达量的增加 | 第51-56页 |
| 4.2.2 慢病毒感染T细胞最佳MOI值的选择 | 第56-58页 |
| 4.2.3 筛选敲减PD-1基因效果最佳的慢病毒 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第59-65页 |
| 4.3.1 细胞因子刺激Jurkat细胞PD-1表达量增加 | 第59-60页 |
| 4.3.2 筛选病毒感染T细胞的最佳MOI值 | 第60-64页 |
| 4.3.3 筛选敲减T细胞PD-1基因效果最佳的慢病毒 | 第64-65页 |
| 论文总结与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在学期间所取得的科研成果 | 第72页 |
