| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一部分 HBx基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第16-30页 |
| 一 材料与仪器 | 第16-17页 |
| 1 血清样本 | 第16页 |
| 2 试剂与主要耗材 | 第16-17页 |
| 3 主要仪器 | 第17页 |
| 二 实验方法 | 第17-25页 |
| 1 HBV x基因的提取鉴定 | 第17-19页 |
| 1.1 乙肝病毒患者血清DNA的提取 | 第17-18页 |
| 1.2 HBx基因的PCR扩增 | 第18-19页 |
| 1.3 PCR扩增产物的凝胶电泳鉴定 | 第19页 |
| 2 HBx基因测序载体构建与鉴定 | 第19-22页 |
| 2.1 PCR扩增产物胶回收 | 第19-20页 |
| 2.2 紫外分光光度法测DNA浓度 | 第20页 |
| 2.3 HBV X基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.4 测序质粒的提取 | 第21页 |
| 2.5 HBV X基因测序载体的鉴定 | 第21-22页 |
| 3 HBx基因真核表达载体构建与鉴定 | 第22-25页 |
| 3.1 HBV X基因的酶切及胶回收 | 第22-23页 |
| 3.2 T4连接酶连接反应 | 第23页 |
| 3.3 转化和培养 | 第23-24页 |
| 3.4 重组质粒pcDNA3.1-X的浓度和纯度测定 | 第24页 |
| 3.5 重组质粒pcDNA3.1-X的鉴定 | 第24-25页 |
| 三 结果 | 第25-29页 |
| 1 HBV X基因的凝胶电泳实验结果 | 第25页 |
| 2 HBV x基因真核载体鉴定结果 | 第25-29页 |
| 四 讨论 | 第29-30页 |
| 第二部分 HBx 转染 SUDHL-4 对其生长侵袭转移的影响 | 第30-59页 |
| 一 材料与仪器 | 第30-32页 |
| 1 细胞株 | 第30页 |
| 2 试剂与主要耗材 | 第30-31页 |
| 3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 二 所需溶液的配制 | 第32-35页 |
| 1 SUDHL-4 细胞培养所需溶液的配制 | 第32-33页 |
| 1.1 含 10%胎牛血清的RPMI-1640培养液 | 第32页 |
| 1.2 台盼蓝染液 | 第32-33页 |
| 1.3 PBS缓冲溶液 | 第33页 |
| 1.4 细胞冻存液 | 第33页 |
| 2 转染后细胞粘附、迁移及侵袭实验所需溶液的配制 | 第33-34页 |
| 2.1 MTT溶液 | 第33页 |
| 2.2 FN溶液 | 第33页 |
| 2.3 BSA溶液 | 第33页 |
| 2.4 结晶紫溶液 | 第33-34页 |
| 3 Western Bolt实验所需溶液的配制 | 第34-35页 |
| 3.1 电泳缓冲液 | 第34页 |
| 3.2 电转缓冲液 | 第34页 |
| 3.3 5×SDS loading buffer上样缓冲液 | 第34页 |
| 3.4 TBST缓冲液 | 第34页 |
| 3.5 封闭液 | 第34页 |
| 3.6 丽春红染色液 | 第34-35页 |
| 三 实验方法 | 第35-46页 |
| 1 细胞的复苏、培养及冻存 | 第35-36页 |
| 1.1 细胞复苏 | 第35页 |
| 1.2 细胞培养 | 第35页 |
| 1.3 细胞传代 | 第35页 |
| 1.4 细胞冻存 | 第35-36页 |
| 1.5 单细胞悬液制备和细胞计数 | 第36页 |
| 2 细胞转染 | 第36-37页 |
| 2.1 G418筛选剂量确定 | 第36页 |
| 2.2 脂质体转染 | 第36-37页 |
| 2.3 稳定表达HBx基因SUDHL-4 细胞株的筛选 | 第37页 |
| 3 瞬时转染HBx基因对SUDHL-4 细胞凋亡的影响 | 第37-41页 |
| 3.1 SUDHL-4 细胞转染后形态变化及转染情况 | 第37页 |
| 3.2 瞬时转染SUDHL-4 细胞中HBx基因的表达 | 第37-39页 |
| 3.3 瞬时转染HBx基因对SUDHL-4 细胞增殖的影响 | 第39-40页 |
| 3.4 瞬时转染HBx基因对SUDHL-4 细胞周期和凋亡率的影响 | 第40-41页 |
| 4 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞生物学特性的影响 | 第41-46页 |
| 4.1 RT-PCR验证SUDHL4HBx细胞株中HBx mRNA的表达 | 第41页 |
| 4.2 Western Bolt验证SUDHL4HBx细胞中HBx蛋白的表达 | 第41-44页 |
| 4.3 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞增殖的影响 | 第44页 |
| 4.4 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞周期和凋亡的影响 | 第44页 |
| 4.5 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞粘附力、迁移力及侵袭力的影响 | 第44-46页 |
| 4.6 数据分析 | 第46页 |
| 四 结果 | 第46-56页 |
| 1 SUDHL-4 细胞瞬时转染 HBx 后形态变化及转染情况 | 第46-47页 |
| 2 RT-PCR测定瞬时转染HBx基因mRNA的表达 | 第47-48页 |
| 3 瞬时转染HBx基因对SUDHL-4 细胞增殖的影响 | 第48-49页 |
| 4 瞬时转染HBx基因对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第49-50页 |
| 5 稳定表达HBx基因SUDHL-4 细胞株的鉴定 | 第50-51页 |
| 6 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 7 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞周期和凋亡的影响 | 第52-53页 |
| 8 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞粘附力的影响 | 第53-54页 |
| 9 稳定表达HBx基因对SUDHL-4 细胞转移和侵袭的影响 | 第54-56页 |
| 五 讨论 | 第56-58页 |
| 六 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 综述 | 第62-78页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 个人简介 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
