高产类胡萝卜素的红酵母突变菌株筛选及其性能研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 类胡萝卜素概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素定义和分类 | 第11页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 类胡萝卜素的生理功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3.1 抗癌 | 第12页 |
| 1.1.3.2 抗氧化 | 第12页 |
| 1.1.3.3 增强免疫活性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 类胡萝卜素的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.4.1 植物提取 | 第13页 |
| 1.1.4.2 化学合成 | 第13-14页 |
| 1.1.4.3 微生物合成 | 第14页 |
| 1.2 红酵母研究进展 | 第14-19页 |
| 1.2.1 红酵母的分类与特点 | 第14页 |
| 1.2.2 红酵母类胡萝卜素代谢途径研究 | 第14-17页 |
| 1.2.3 红酵母的筛选与改造方法 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 原生质体转化法 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 醋酸锂转化方法 | 第18页 |
| 1.2.3.3 电击转化方方法 | 第18页 |
| 1.2.3.4 其他转化方法 | 第18-19页 |
| 1.3 农杆菌介导转化方法的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 农杆菌介导转化方法的原理 | 第19-21页 |
| 1.3.2 农杆菌介导转化方法的影响因素 | 第21-22页 |
| 1.3.2.1 受体形式的多样性 | 第21页 |
| 1.3.2.2 农杆菌的种类 | 第21页 |
| 1.3.2.3 乙酰丁香酮(AS)的浓度 | 第21页 |
| 1.3.2.4 共培养条件 | 第21-22页 |
| 1.3.3 农杆菌介导转化方法的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 论文的研究意义与内容 | 第23-24页 |
| 第二章 农杆菌介导转化方法的建立和优化 | 第24-40页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 本章所用引物 | 第25页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 培养基的配置 | 第27-28页 |
| 2.3.2 转化方法 | 第28-29页 |
| 2.3.2.1 农杆菌工程菌的构建 | 第28页 |
| 2.3.2.2 农杆菌介导转化方法 | 第28-29页 |
| 2.3.3 转化率的计算 | 第29页 |
| 2.3.4 转化子鉴定与分析 | 第29-31页 |
| 2.3.4.1 圆红冬孢酵母基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.4.2 PCR验证 | 第30页 |
| 2.3.4.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-39页 |
| 2.4.1 农杆菌介导转化法的初步构建 | 第31-32页 |
| 2.4.1.1 转化子在筛选平板上生长状况 | 第31页 |
| 2.4.1.2 转化子表型及基因型验证 | 第31-32页 |
| 2.4.2 不同种类质粒对转化效率的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.3 不同种类农杆菌对转化效率的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.4 不同菌量混合比例对转化效率的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.5 不同浓度的乙酰丁香酮对转化效率的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.6 不同共培养温度对转化效率的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.7 不同共培养时间对转化效率的影响 | 第37页 |
| 2.4.8 转化子鉴定结果 | 第37-39页 |
| 2.4.8.1 转化子的表型特征 | 第38页 |
| 2.4.8.2 转化子的基因型验证 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 突变株类胡萝卜素的生产及成分分析 | 第40-58页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-43页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.3.1 发酵培养基的配制 | 第43页 |
| 3.3.2 培养方法 | 第43页 |
| 3.3.3 分析方法 | 第43-45页 |
| 3.3.3.1 菌体生物量测定 | 第43页 |
| 3.3.3.2 残糖测定 | 第43-45页 |
| 3.3.4 类胡萝卜素提取方法 | 第45页 |
| 3.3.5 类胡萝卜素测量方法 | 第45-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-56页 |
| 3.4.1 类胡萝卜素成分的定性 | 第47-48页 |
| 3.4.2 高产红酵母红素的菌株 | 第48-52页 |
| 3.4.3 高产β-胡萝卜素的菌株 | 第52-55页 |
| 3.4.4 其它突变株 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 T-DNA插入位点的定位及其分析 | 第58-74页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-61页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第58页 |
| 4.2.2 本章所用引物 | 第58-59页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第59-60页 |
| 4.2.4 实验试剂 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 转化子基因组的提取 | 第61页 |
| 4.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第61页 |
| 4.3.3 染色体步移技术原理和方法 | 第61-63页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第63-73页 |
| 4.4.1 TAIL-PCR电泳结果 | 第63-67页 |
| 4.4.2 T-DNA插入位点 | 第67-70页 |
| 4.4.3 插入位点对类胡萝卜素合成途径的影响 | 第70-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第五章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 结论 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 研究生取得成果 | 第84-86页 |
| 附录 | 第86-93页 |
