| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略表 | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 微生物油脂 | 第12-14页 |
| 1.2 产油微生物 | 第14-17页 |
| 1.2.1 产油细菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 产油藻类 | 第15-16页 |
| 1.2.3 产油霉菌 | 第16页 |
| 1.2.4 产油酵母 | 第16-17页 |
| 1.3 微生物油脂合成机制 | 第17-19页 |
| 1.3.1 脂肪酸的生物合成途径 | 第18-19页 |
| 1.3.2 甘油三酯(TAG)的生物合成途径 | 第19页 |
| 1.4 产油酵母油脂积累的遗传改造 | 第19-22页 |
| 1.4.1 增加脂肪酸合成的前体 | 第20-21页 |
| 1.4.2 过量表达三酰甘油合成的关键酶 | 第21页 |
| 1.4.3 阻断脂肪酸的降解途径 | 第21-22页 |
| 1.5 脂肪酸脱氢酶的研究概况 | 第22-25页 |
| 1.5.1 脂肪酸脱氢酶分类 | 第22-23页 |
| 1.5.2 脱氢酶催化合成不饱和脂肪酸的途径 | 第23-24页 |
| 1.5.3 表达脂肪酸脱氢酶生产特殊脂肪酸 | 第24-25页 |
| 1.6 论文立项依据和研究内容 | 第25-28页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第25-26页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 构建高产油脂的解脂亚罗酵母菌株 | 第28-54页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第28-30页 |
| 2.2.2 培养基 | 第30页 |
| 2.2.3 溶液与缓冲液 | 第30页 |
| 2.2.4 酶与生化试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.5 仪器和设备 | 第31页 |
| 2.3 试验方法 | 第31-37页 |
| 2.3.1 Y.lipolytica Polf菌株基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 PCR扩增目的片段 | 第32-33页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳及目的DNA片段回收 | 第33页 |
| 2.3.4 限制性内切酶酶切及酶切产物连接 | 第33-34页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34-35页 |
| 2.3.6 酵母转化 | 第35页 |
| 2.3.7 敲除菌株的PCR验证及URA3标记去除 | 第35-36页 |
| 2.3.8 酵母细胞生长的测定 | 第36页 |
| 2.3.9 脂肪酸成分分析 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-51页 |
| 2.4.1 构建pex10-菌株及其产油特征 | 第37-43页 |
| 2.4.2 构建mfe-菌株及其产油特征 | 第43-46页 |
| 2.4.3 构建pex10-DGA1+菌株及其产油特征 | 第46-49页 |
| 2.4.4 构建YL-AD10 (ACC1~+ DGA1~+pex10~-)菌株及其产油特征 | 第49-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-54页 |
| 第3章 脂肪酸脱氢酶—△9,12,15对油脂积累的影响 | 第54-74页 |
| 3.1 前言 | 第54-55页 |
| 3.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 3.2.1 质粒和菌株 | 第55-56页 |
| 3.2.2 培养基 | 第56页 |
| 3.2.3 酶和试剂 | 第56页 |
| 3.2.4 仪器和设备 | 第56-57页 |
| 3.2.5 目的基因 | 第57页 |
| 3.3 试验方法 | 第57-58页 |
| 3.3.1 PCR扩增目的SCD、12D基因 | 第57-58页 |
| 3.3.2 尼罗红染色 | 第58页 |
| 3.3.3 激光共聚焦显微镜 | 第58页 |
| 3.4 结果与分析 | 第58-71页 |
| 3.4.1 游离表达SCD、12D、15D及其产油特征 | 第58-64页 |
| 3.4.2 游离表达12D-SCD及其产油特征 | 第64-67页 |
| 3.4.3 游离表达15D-SCD及其产油特征 | 第67-68页 |
| 3.4.4 游离表达15D-12D及其产油特征 | 第68-71页 |
| 3.5 本章小结 | 第71-74页 |
| 第4章 重组菌株YL-12D15DA发酵生产油脂的研究 | 第74-80页 |
| 4.1 前言 | 第74页 |
| 4.2 实验材料 | 第74-75页 |
| 4.2.1 菌株 | 第74页 |
| 4.2.2 培养基 | 第74页 |
| 4.2.3 试剂 | 第74页 |
| 4.2.4 设备 | 第74-75页 |
| 4.3 试验方法 | 第75页 |
| 4.3.1 培养方法 | 第75页 |
| 4.3.2 超临界二氧化碳萃取微生物油脂 | 第75页 |
| 4.4 结果与分析 | 第75-78页 |
| 4.4.1 发酵罐内po1f细胞生长及其产油情况 | 第75-76页 |
| 4.4.2 发酵罐内重组菌株YL-12D15DA细胞生长及其产油情况 | 第76-78页 |
| 4.5 结论 | 第78-80页 |
| 第5章 结论与展望 | 第80-82页 |
| 5.1 结论 | 第80-81页 |
| 5.2 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第94页 |
