| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-31页 |
| 1.1 核桃 | 第18-19页 |
| 1.1.1 核桃病害 | 第19页 |
| 1.1.2 核桃转基因育种 | 第19页 |
| 1.2 植物对炭疽病菌的抗性防卫机理研究 | 第19-23页 |
| 1.2.1 分子抗病研究 | 第20-21页 |
| 1.2.2 化学物质及代谢抗病研究 | 第21-23页 |
| 1.3 植物富含脯氨酸蛋白 | 第23-28页 |
| 1.3.1 富含脯氨酸蛋白的结构特征及分类 | 第24-25页 |
| 1.3.2 富含脯氨酸蛋白基因的表达特性 | 第25-26页 |
| 1.3.2.1 发育阶段和组织特异性表达 | 第25页 |
| 1.3.2.2 对信号分子以及逆境胁迫的响应 | 第25-26页 |
| 1.3.3 富含脯氨酸蛋白的功能 | 第26-28页 |
| 1.3.3.1 维持细胞结构的稳定性 | 第26-27页 |
| 1.3.3.2 参与植物对逆境胁迫的防卫反应 | 第27-28页 |
| 1.3.3.3 其他功能 | 第28页 |
| 1.4 脂质转移蛋白 | 第28-29页 |
| 1.5 本课题的研究意义及目的 | 第29-31页 |
| 第二章 漾濞大泡核桃JsPRP1基因的克隆与表达特性分析 | 第31-49页 |
| 2.1 前言 | 第31页 |
| 2.2 材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第31页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第32页 |
| 2.3 方法 | 第32-39页 |
| 2.3.1 植物材料的处理及样品采集 | 第32-33页 |
| 2.3.2 RNA的提取及mRNA的分离 | 第33页 |
| 2.3.3 5’RACE及3’RACE | 第33-35页 |
| 2.3.3.1 RACE引物设计 | 第33-34页 |
| 2.3.3.2 RACE cDNA第一链的合成 | 第34页 |
| 2.3.3.3 RACE扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.4 T-A克隆 | 第35页 |
| 2.3.4.1 DNA片段连接 | 第35页 |
| 2.3.4.2 转化大肠杆菌 | 第35页 |
| 2.3.5 全长cDNA的克隆及生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 2.3.5.1 全长cDNA序列的扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.5.2 生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.3.6 基因编码区序列扩增及内含子分析 | 第36-37页 |
| 2.3.6.1 CTAB法提取基因组DNA | 第36-37页 |
| 2.3.6.2 编码区序列的扩增及内含子分析 | 第37页 |
| 2.3.7 qRT-PCR | 第37-39页 |
| 2.4 结果与分析 | 第39-46页 |
| 2.4.1 JsPRP1全长cDNA克隆及内含子分析 | 第39-41页 |
| 2.4.2 生物信息学分析 | 第41-45页 |
| 2.4.2.1 序列同源性分析 | 第41页 |
| 2.4.2.2 理化性质 | 第41页 |
| 2.4.2.3 信号肽及亚细胞定位分析 | 第41-42页 |
| 2.4.2.4 跨膜结构预测 | 第42-43页 |
| 2.4.2.5 二级结构分析 | 第43页 |
| 2.4.2.6 多重序列比对和系统进化分析 | 第43-44页 |
| 2.4.2.7 三维结构预测 | 第44-45页 |
| 2.4.3 表达谱分析 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 JsPRP1的原核表达及抑菌活性分析 | 第49-65页 |
| 3.1 前言 | 第49页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第49-52页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第49-50页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第50页 |
| 3.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第50-52页 |
| 3.3 方法 | 第52-57页 |
| 3.3.1 JsPRP1的扩增 | 第52页 |
| 3.3.2 原核表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2.1 质粒提取及纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.2.2 酶切反应 | 第53页 |
| 3.3.2.3 胶回收 | 第53-54页 |
| 3.3.2.4 DNA连接 | 第54页 |
| 3.3.3 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第54页 |
| 3.3.4 His-JsPRP1融合蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| 3.3.5 外源蛋白的提取和纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.6 外源蛋白的超滤浓缩 | 第56-57页 |
| 3.3.7 外源蛋白抑菌活性的测定 | 第57页 |
| 3.3.7.1 真菌的预培养 | 第57页 |
| 3.3.7.2 平板抑菌实验 | 第57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-62页 |
| 3.4.1 JsPRP1原核表达载体的构建及转化 | 第57-58页 |
| 3.4.2 JsPRP1的诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.4.3 融合蛋白的纯化 | 第59-61页 |
| 3.4.4 融合蛋白的抑菌活性分析 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 JsPRP1的亚细胞定位 | 第65-72页 |
| 4.1 前言 | 第65页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第65-67页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第65页 |
| 4.2.2 菌株和载体 | 第65-66页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第66页 |
| 4.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第66-67页 |
| 4.3 方法 | 第67-69页 |
| 4.3.1 亚细胞定位载体的构建 | 第67页 |
| 4.3.2 农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第67页 |
| 4.3.3 CaCl_2冻融法转化农杆菌EHA105感受态细胞 | 第67-68页 |
| 4.3.4 PCR反应 | 第68页 |
| 4.3.5 农杆菌EHA105活化 | 第68页 |
| 4.3.6 农杆菌EHA105侵染洋葱表皮 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与分析 | 第69-70页 |
| 4.4.1 JsPRP1亚细胞定位载体的构建 | 第69页 |
| 4.4.2 JSPRP1亚细胞定位载体转化根癌农杆菌 | 第69-70页 |
| 4.4.3 JsPRP1-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 JsPRP1在转基因烟草中的功能分析 | 第72-86页 |
| 5.1 前言 | 第72页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第72-74页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第72页 |
| 5.2.2 菌株和载体 | 第72-73页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第73页 |
| 5.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第73-74页 |
| 5.3 方法 | 第74-77页 |
| 5.3.1 植物超表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 5.3.2 农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第75页 |
| 5.3.3 CaCl_2冻融法转化农杆菌LBA4404感受态细胞 | 第75页 |
| 5.3.4 PCR反应 | 第75页 |
| 5.3.5 农杆菌LBA4404活化 | 第75页 |
| 5.3.6 叶盘转化法 | 第75页 |
| 5.3.7 转基因烟草的筛选 | 第75-76页 |
| 5.3.8 转基因烟草中JsPRP1表达水平分析 | 第76页 |
| 5.3.9 转基因烟草的非生物胁迫处理 | 第76-77页 |
| 5.3.10 转基因烟草对胶孢炭疽菌的抗性分析 | 第77页 |
| 5.3.11 数据处理 | 第77页 |
| 5.4 结果与分析 | 第77-83页 |
| 5.4.1 JsPRP1植物超表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 5.4.2 JsPRP1植物超表达载体转化根癌农杆菌 | 第78页 |
| 5.4.3 JsPRP1转基因烟草的产生 | 第78-79页 |
| 5.4.4 JsPRP1转基因烟草的筛选 | 第79页 |
| 5.4.5 转基因烟草中JsPRP1的转录水平分析 | 第79-80页 |
| 5.4.6 转基因烟草提高了对干旱和镉胁迫的耐受性 | 第80-83页 |
| 5.4.7 转基因烟草的胶孢炭疽菌的耐受性 | 第83页 |
| 5.5 讨论 | 第83-86页 |
| 第六章 结论与展望 | 第86-89页 |
| 6.1 结论 | 第86-88页 |
| 6.2 展望 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表论文 | 第102页 |
| 申请专利 | 第102页 |
