| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 英汉缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 研究现状 | 第12-15页 |
| 1.1.1 肿瘤微环境及肿瘤细胞糖酵解代谢特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 戊糖磷酸途径与肿瘤 | 第13-14页 |
| 1.1.3 肿瘤细胞代谢重编程的调控机制 | 第14-15页 |
| 1.1.4 转录调控因子Yin Yang1研究进展 | 第15页 |
| 1.2 本文研究的目的和研究内容 | 第15-18页 |
| 1.2.1 本文研究的目的 | 第15-16页 |
| 1.2.2 本文的主要研究内容 | 第16-18页 |
| 2 YY1对结肠癌细胞糖代谢的影响 | 第18-28页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.1 细胞及主要仪器、设备 | 第18页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第18页 |
| 2.2.3 细胞培养常用试剂配制 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第19页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第19-20页 |
| 2.3.3 转染预实验 | 第20-21页 |
| 2.3.4 质粒转染和筛选 | 第21页 |
| 2.3.5 葡萄糖检测 | 第21-23页 |
| 2.3.6 乳酸检测 | 第23页 |
| 2.3.7 细胞总蛋白提取及蛋白定量 | 第23-24页 |
| 2.4 实验结果 | 第24-26页 |
| 2.4.1 质粒敲减效果验证 | 第24页 |
| 2.4.2 YY1对HCT116葡萄糖摄取的影响 | 第24-25页 |
| 2.4.3 YY1对HCT116细胞乳酸生成的影响 | 第25-26页 |
| 2.5 本章小结 | 第26-28页 |
| 3 YY1对糖酵解代谢过程关键调控因子的影响 | 第28-40页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第28-32页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第28页 |
| 3.2.2 实验仪器及耗材 | 第28-29页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第29-30页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制方案 | 第30-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.3.1 细胞处理 | 第32页 |
| 3.3.2 RNA提取 | 第32页 |
| 3.3.3 RT-PCR | 第32-33页 |
| 3.3.4 Real-Time PCR | 第33-35页 |
| 3.3.5 蛋白检测 | 第35-36页 |
| 3.3.6 数据分析 | 第36页 |
| 3.4 实验结果 | 第36-39页 |
| 3.4.1 YY1对肿瘤细胞糖酵解代谢通路关键因子的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.2 YY1对G6PD的影响 | 第37-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 4 YY1调控戊糖磷酸途径功能 | 第40-56页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 实验试剂与仪器 | 第40-41页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第40页 |
| 4.2.2 实验仪器及耗材 | 第40页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第40页 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| 4.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第41页 |
| 4.3.2 葡萄糖6磷酸脱氢酶活性检测 | 第41页 |
| 4.3.3 NADPH含量测定 | 第41-42页 |
| 4.3.4 EdU染色检测DNA复制活性 | 第42-43页 |
| 4.3.5 活性氧检测 | 第43页 |
| 4.3.6 MTT检测细胞数目 | 第43页 |
| 4.3.7 数据分析 | 第43-44页 |
| 4.4 实验结果 | 第44-54页 |
| 4.4.1 YY1对葡萄糖6磷酸脱氢酶活性的影响 | 第44页 |
| 4.4.2 YY1对DNA复制活性的影响 | 第44-45页 |
| 4.4.3 YY1对NADPH水平的影响 | 第45-46页 |
| 4.4.4 YY1对活性氧水平的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.5 YY1通过G6PD促进磷酸戊糖途径的功能 | 第47-50页 |
| 4.4.6 YY1通过p53非依赖途径促进磷酸戊糖途径的功能 | 第50-54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 5 YY1调控戊糖磷酸途径的分子机制 | 第56-68页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第56页 |
| 5.2.2 实验仪器及耗材 | 第56页 |
| 5.2.3 实验试剂 | 第56-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-64页 |
| 5.3.1 构建G6PD报告基因载体 | 第57-60页 |
| 5.3.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第60-61页 |
| 5.3.3 染色质免疫共沉淀 | 第61-64页 |
| 5.3.4 PCR法构建点变异质粒 | 第64页 |
| 5.4 实验结果 | 第64-67页 |
| 5.4.1 YY1调控G6PD转录活性 | 第64-65页 |
| 5.4.2 YY1结合G6PD启动子 | 第65-66页 |
| 5.4.3 YY1直接结合G6PD启动子区 | 第66-67页 |
| 5.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 6 YY1和G6PD在结肠组织中的相关性分析 | 第68-74页 |
| 6.1 引言 | 第68页 |
| 6.2 实验材料、试剂与仪器 | 第68-69页 |
| 6.2.1 组织样本 | 第68页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第68-69页 |
| 6.2.3 实验仪器 | 第69页 |
| 6.3 实验方法 | 第69-70页 |
| 6.3.1 H&E染色 | 第69-70页 |
| 6.3.2 免疫组化 | 第70页 |
| 6.3.3 数据分析 | 第70页 |
| 6.4 实验结果 | 第70-73页 |
| 6.4.1 YY1和G6PD mRNA表达量在结肠癌组织中呈正相关 | 第70-71页 |
| 6.4.2 YY1和G6PD蛋白表达量在结肠癌组织中呈正相关 | 第71-72页 |
| 6.4.3 IHC染色YY1和G6PD表达量在结肠癌组织中呈正相关 | 第72-73页 |
| 6.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 7 总结与展望 | 第74-76页 |
| 7.1 总结 | 第74-75页 |
| 7.2 展望 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第82页 |
