| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 木质纤维素燃料乙醇 | 第13页 |
| 1.2 乙醇生产首选菌株——酿酒酵母 | 第13页 |
| 1.3 木糖还原酶-木糖醇脱氢酶途径 | 第13-14页 |
| 1.4 木糖异构酶途径 | 第14页 |
| 1.5 下游途径改造 | 第14-15页 |
| 1.6 其他相关基因对木糖代谢的影响 | 第15页 |
| 1.7 木糖代谢重组菌株的驯化及系统生物学分析 | 第15-18页 |
| 1.7.1 木糖代谢重组菌株的驯化 | 第15-17页 |
| 1.7.2 系统生物学研究 | 第17-18页 |
| 1.8 酿酒酵母Ask10p蛋白参与胁迫应答 | 第18-20页 |
| 1.9 实验室前期工作 | 第20页 |
| 1.10 本论文研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验仪器和耗材 | 第21页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第21-24页 |
| 2.3 引物 | 第24-26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.4.1 DNA扩增、纯化和测序 | 第26页 |
| 2.4.2 一步恒温连接(Gibson Assembly) | 第26页 |
| 2.4.3 大肠杆菌质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.4.4 大肠杆菌转化 | 第27页 |
| 2.4.5 酵母转化 | 第27-28页 |
| 2.4.6 酵母质粒提取 | 第28页 |
| 2.4.7 酵母染色体提取 | 第28页 |
| 2.4.8 基因敲除和基因原位突变 | 第28-30页 |
| 2.4.10 Ru-Ⅺ酶活测定 | 第30页 |
| 2.4.11 acZ酶活测定 | 第30-31页 |
| 2.4.12 XR-XDH酶活测定 | 第31页 |
| 2.4.13 ELISA蛋白含量测定 | 第31-32页 |
| 2.4.14 点滴平板实验 | 第32页 |
| 2.4.15 基因组测序 | 第32-33页 |
| 2.4.16 酵母总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.4.17 RNA反转录和荧光定量PCR | 第34页 |
| 2.4.18 转录组分析 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-55页 |
| 3.1 驯化后菌株木糖异构酶各个水平测定 | 第36-40页 |
| 3.2 基因组分析 | 第40-43页 |
| 3.2.1 测序结果总结 | 第40-42页 |
| 3.2.2 突变基因功能富集分析 | 第42-43页 |
| 3.3 突变基因功能鉴定 | 第43-46页 |
| 3.3.1 背景菌株选择 | 第43页 |
| 3.3.2 候选基因菌株构建 | 第43-44页 |
| 3.3.3 木糖平板生长实验 | 第44-46页 |
| 3.4 ASK10功能分析 | 第46-51页 |
| 3.4.1 点突变M475R对ASK10功能完整性的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.2 ASK10原位突变和敲除/超表达菌木糖生长实验 | 第47-49页 |
| 3.4.3 ASK10对木糖代谢的影响 | 第49-51页 |
| 3.5 转录组分析 | 第51-55页 |
| 3.5.1 测序质量评估 | 第51-52页 |
| 3.5.2 差异基因筛选和分析 | 第52-55页 |
| 全文总结 | 第55-57页 |
| 附录 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66页 |
