| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-14页 |
| 第一章 肿瘤的生物治疗及PPA 的应用 | 第14-20页 |
| ·前言 | 第14-15页 |
| ·溶瘤腺病毒的发展与研究概述 | 第15-17页 |
| ·腺病毒载体的应用优势和发展 | 第16页 |
| ·肿瘤特异性增殖腺病毒目前常用构建策略 | 第16-17页 |
| ·SURVIVIN 与肿瘤靶向 | 第17-18页 |
| ·SURVIVIN 概述 | 第17-18页 |
| ·针对SURVIVIN 的各种肿瘤治疗策略 | 第18页 |
| ·掌叶半夏凝集素概述及在肿瘤医学研究中的应用 | 第18-19页 |
| ·结论 | 第19-20页 |
| 第二章 Survivin 介导的肿瘤特异性增殖腺病毒携带PPA 基因治疗癌症研究 | 第20-47页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·质粒和菌株 | 第20页 |
| ·病毒 | 第20页 |
| ·生化试剂 | 第20-21页 |
| ·细胞株 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·引物合成 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-35页 |
| ·重组质粒PAD-E18(△55)-SURP-PPA 的构建 | 第23-30页 |
| ·质粒PCA13-SURP-PPA 的构建 | 第27-29页 |
| ·质粒PAD-E18(△55)-SURP-PPA 的构建 | 第29-30页 |
| ·同源重组法构建重组腺病毒 | 第30页 |
| ·病毒的空斑纯化 | 第30-31页 |
| ·重组病毒的小量扩增及鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组病毒的大量制备与CSCL 梯度离心纯化病毒 | 第32-34页 |
| ·结晶紫染色观察腺病毒细胞杀伤 | 第34页 |
| ·MTT 检测细胞的存活 | 第34页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第34页 |
| ·WESTERN BLOT | 第34-35页 |
| ·实验结果与分析 | 第35-44页 |
| ·质粒鉴定 | 第35-38页 |
| ·重组质粒PMD18-T-SP 的酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒PCA13-SURP 的酶切鉴定结果 | 第36页 |
| ·重组质粒PMD18-T-PPA 的酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·携带目的基因PPA 的重组质粒PCA13-SURP-PPA 的酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·重组病毒所需小质粒PAD-E18(△55) -SURP-PPA 的酶切鉴定结果 | 第38页 |
| ·病毒鉴定 | 第38-40页 |
| ·病毒AD-E18(△55) -SURP-PPA 的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·病毒空斑纯化鉴定 | 第39-40页 |
| ·MTT 实验分析不同时间的细胞存活率 | 第40-42页 |
| ·结晶紫实验分析溶瘤病毒AD·SP·E1A(△24)·E18(△55)·IL-24 对肿瘤细胞的毒性 | 第42页 |
| ·病毒诱导细胞凋亡 | 第42-43页 |
| ·WESTERN BLOT 检测凋亡通路中关键蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·讨论与展望 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 硕士研究生期间的研究成果 | 第52-53页 |
| 附录一 质粒构建构建示意图 | 第53页 |
