柞蚕防御基因defense的克隆、表达与功能分析
| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-13页 |
| 1.1 昆虫免疫概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 细胞免疫 | 第8-9页 |
| 1.1.2 体液免疫 | 第9页 |
| 1.2 防御基因Def的相关研究 | 第9-11页 |
| 1.3 柞蚕免疫研究进展 | 第11-13页 |
| 2 引言 | 第13-15页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第13页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第13-14页 |
| 2.2.1 柞蚕Def基因cDNA的测定 | 第13页 |
| 2.2.2 柞蚕Def基因完整ORF的原核表达 | 第13-14页 |
| 2.2.3 柞蚕Def重组蛋白的纯化 | 第14页 |
| 2.2.4 柞蚕Def基因转录水平的研究 | 第14页 |
| 2.3 技术路线 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第15页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第15-19页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第15-16页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第16页 |
| 3.2.3 主要溶液的配置 | 第16-19页 |
| 3.3 实验方法 | 第19-29页 |
| 3.3.1 柞蚕饲养 | 第19页 |
| 3.3.2 柞蚕总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 3.3.3 总RNA质量的检测 | 第20页 |
| 3.3.4 柞蚕Def基因的克隆 | 第20-23页 |
| 3.3.5 柞蚕Def基因的原核表达 | 第23-25页 |
| 3.3.6 重组蛋白的检测 | 第25-26页 |
| 3.3.7 重组蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第26-27页 |
| 3.3.8 实时定量PCR | 第27页 |
| 3.3.9 组织中总蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 3.3.10 组织表达分布 | 第28页 |
| 3.3.11 免疫刺激对Def表达的影响 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-41页 |
| 4.1 柞蚕的总RNA的检测 | 第29页 |
| 4.2 ApDef基因序列的测定和分析 | 第29-31页 |
| 4.3 ApDef与其他昆虫Def的同源性分析 | 第31-32页 |
| 4.4 ApDef生物信息学分析 | 第32-35页 |
| 4.4.1 蛋白质基本理化性质分析 | 第32-33页 |
| 4.4.2 亲疏水性预测 | 第33页 |
| 4.4.3 跨膜区域结果预测 | 第33-34页 |
| 4.4.4 Apdef蛋白的信号肽分析 | 第34-35页 |
| 4.4.5 蛋白定位的预测 | 第35页 |
| 4.5 原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 4.5.1 ApDef全长ORF的扩增 | 第35页 |
| 4.5.2 双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 4.6 ApDef的原核表达 | 第36页 |
| 4.6.1 IPTG不同诱导浓度的原核表达 | 第36页 |
| 4.7 Western blot检测 | 第36-37页 |
| 4.8 Apdef蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 4.9 组织表达分布 | 第38-41页 |
| 5 讨论 | 第41-42页 |
| 6 结论 | 第42-43页 |
| 7 参考文献 | 第43-48页 |
| 8 致谢 | 第48-49页 |
| 个人简介 | 第49-50页 |
| 发表的论文 | 第50页 |
