| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 鸡毒支原体病研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.1 鸡毒支原体病原学 | 第16-17页 |
| 1.1.2 鸡毒支原体流行病学 | 第17页 |
| 1.1.3 鸡毒支原体病的临床症状与病理变化 | 第17-18页 |
| 1.1.4 鸡毒支原体病的诊断 | 第18-19页 |
| 1.1.5 鸡毒支原体病的防治 | 第19-21页 |
| 1.2 鸡毒支原体致病机理 | 第21-22页 |
| 1.2.1 鸡毒支原体的病理反应 | 第21页 |
| 1.2.2 鸡毒支原体的致病性 | 第21-22页 |
| 1.2.3 鸡毒支原体的免疫损伤机理 | 第22页 |
| 1.2.4 鸡毒支原体感染与细胞凋亡 | 第22页 |
| 1.3 支原体与细胞凋亡研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.1 支原体诱导的细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 1.3.2 宿主NF-κB信号通路与支原体诱导的细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 1.4 病原微生物核酸酶蛋白的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 鸡毒支原体MGA_0676原核表达及其性质鉴定研究 | 第26-51页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料和方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 鸡毒支原体 | 第26页 |
| 2.2.2 载体及菌株 | 第26页 |
| 2.2.3 主要试剂及酶 | 第26页 |
| 2.2.4 主要溶剂及其配制 | 第26-29页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.2.6 鸡毒支原体的培养 | 第29页 |
| 2.2.7 鸡毒支原体基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.8 MGA_0676基因的扩增与定点突变 | 第30-32页 |
| 2.2.9 MGA_0676蛋白结构分析预测 | 第32-33页 |
| 2.2.10 pET-28a-MGA_0676及pET-28a-MGA_0676~(△SNC)的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.11 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第35-37页 |
| 2.2.12 重组蛋白浓度测定 | 第37页 |
| 2.2.13 重组蛋白的免疫印迹鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.14 重组蛋白性质的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.2.15 本章节技术路线 | 第40-41页 |
| 2.3 结果 | 第41-49页 |
| 2.3.0 MGA_0676基因的克隆及其点突变结果 | 第41页 |
| 2.3.1 MGA_0676蛋白结构分析 | 第41-43页 |
| 2.3.2 pET-28a-MGA_0676和pET-28a-MGA_0676~(△SNC)载体的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.3 重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第44-45页 |
| 2.3.4 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3.5 蛋白定量标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 2.3.6 MGA_0676蛋白核酸酶活性检测 | 第47-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 鸡毒支原体MGA_0676蛋白诱导细胞凋亡及内化细胞研究 | 第51-76页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料和方法 | 第51-64页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第51-54页 |
| 3.2.2 试验方法 | 第54-64页 |
| 3.3 结果 | 第64-74页 |
| 3.3.1 MGA_0676及其突变体(MGA_0676~(△SNC))真核表达载体构建 | 第64-65页 |
| 3.3.2 MGA_0676是鸡毒支原体膜相关的脂蛋白 | 第65-66页 |
| 3.3.3 MGA_0676体外诱导DF-1细胞凋亡 | 第66-68页 |
| 3.3.4 MGA_0676体内诱导DF-1细胞凋产 | 第68-69页 |
| 3.3.5 MGA_0676功能区SNC区域是诱导细胞凋亡的活性区 | 第69-71页 |
| 3.3.6 MGA_0676功能区SNC区域是其核定位的重要区域 | 第71-72页 |
| 3.3.7 MGA_0676内化及诱导哺乳动物细胞凋亡 | 第72-74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-75页 |
| 3.5 小结 | 第75-76页 |
| 第四章 鸡毒支原体MGA_0676内化细胞机理研究 | 第76-88页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 材料和方法 | 第76-81页 |
| 4.2.1 试验材料 | 第76-77页 |
| 4.2.2 试验方法 | 第77-81页 |
| 4.3 结果 | 第81-86页 |
| 4.3.1 MGA_0676蛋白内化细胞具有剂量依赖性与时间依赖性 | 第81-82页 |
| 4.3.2 Caveolin抑制剂Filipin对MGA_0676蛋白内化细胞影响 | 第82-83页 |
| 4.3.3 激光共聚焦观察抑制剂对MGA_0676蛋白内化细胞的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.4 小干扰RNA抑制Caveolin途径影响MGA_0676蛋白内化细胞 | 第84-85页 |
| 4.3.5 MGA_0676蛋白与Caveolin在DF-1细胞内共定位 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-87页 |
| 4.5 小结 | 第87-88页 |
| 第五章 鸡毒支原体MGA_0676蛋白与DF-1细胞相互作用研究 | 第88-105页 |
| 5.1 引言 | 第88页 |
| 5.2 材料和方法 | 第88-96页 |
| 5.2.1 试验材料 | 第88-90页 |
| 5.2.2 试验方法 | 第90-96页 |
| 5.3 结果 | 第96-103页 |
| 5.3.1 pulldown筛选与MGA_0676相互作用的DF-1细胞蛋白 | 第96页 |
| 5.3.2 生物信息学分析MGA_0676与宿主细胞蛋白相互作用 | 第96-97页 |
| 5.3.3 NAE基因RT-PCR扩增及其载体构建 | 第97-98页 |
| 5.3.4 原核表达及纯化NAE | 第98-99页 |
| 5.3.5 免疫印迹检测NAE高免血清 | 第99页 |
| 5.3.6 免疫共沉淀验证MGA_0676蛋白与细胞NAE蛋白相互作用 | 第99-100页 |
| 5.3.7 激光共聚焦显微镜观察MGA_0676和NAE在细胞中共定位 | 第100-102页 |
| 5.3.8 MGA_0676蛋白SNC区域与NAE蛋白的Thif区域相互作用 | 第102-103页 |
| 5.4 讨论 | 第103-104页 |
| 5.5 小结 | 第104-105页 |
| 第六章 鸡毒支原体MGA_0676与NAE相互作用对细胞凋亡的影响 | 第105-112页 |
| 6.1 引言 | 第105页 |
| 6.2 材料和方法 | 第105-108页 |
| 6.2.1 试验材料 | 第105-106页 |
| 6.2.2 试验方法 | 第106-108页 |
| 6.3 结果 | 第108-111页 |
| 6.3.1 筛选最优的抑制DF-1细胞NAE表达的小干扰RNA序列 | 第108页 |
| 6.3.2 细胞NAE表达抑制对MGA_0676及鸡毒支原体诱导细胞病变影响 | 第108-109页 |
| 6.3.3 细胞NAE表达抑制对MGA_0676及鸡毒支原体诱导细胞凋亡影响 | 第109-111页 |
| 6.4 讨论 | 第111页 |
| 6.5 小结 | 第111-112页 |
| 第七章 鸡毒支原体MGA_0676蛋白激活NF-κB诱导细胞凋亡作用机制 | 第112-127页 |
| 7.1 引言 | 第112页 |
| 7.2 材料和方法 | 第112-118页 |
| 7.2.1 试验材料 | 第112-113页 |
| 7.2.2 试验方法 | 第113-118页 |
| 7.3 结果 | 第118-125页 |
| 7.3.1 MGA_0676蛋白激活DF-1细胞NF-κB | 第118-120页 |
| 7.3.2 鸡毒支原体激活DF-1细胞NF-κB | 第120-121页 |
| 7.3.3 免疫印迹检测MGA_0676与NAE相互作用激活DF-1细胞NF-κB | 第121页 |
| 7.3.4 激光共聚焦检测MGA_0676与NAE互作对DF-1细胞Rela的转位 | 第121-123页 |
| 7.3.5 免疫印迹检测DF-1细胞Rela干扰结果 | 第123页 |
| 7.3.6 NF-κB激活对MGA_0676蛋白诱导细胞凋亡影响 | 第123-125页 |
| 7.4 讨论 | 第125页 |
| 7.5 小结 | 第125-127页 |
| 第八章 结论 | 第127-128页 |
| 第九章 创新点 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 作者简历 | 第140页 |
