| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 耐高温α-淀粉酶酶概述 | 第11-17页 |
| 1.1.1 耐高温α-淀粉酶产生菌 | 第11页 |
| 1.1.2 耐高温α-淀粉酶产生菌育种研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.3 耐高温α淀粉酶基因的表达调控 | 第12-13页 |
| 1.1.4 耐高温α淀粉酶的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.5 α-淀粉酶的催化机理 | 第14-15页 |
| 1.1.6 耐高温α-淀粉酶的性质 | 第15-16页 |
| 1.1.7 耐高温α淀粉酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-19页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达系统的研究状况 | 第17-18页 |
| 1.2.2 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第18-19页 |
| 1.2.3 影响外源基因在巴斯德毕赤酵母表达的因素 | 第19页 |
| 1.2.4 巴斯德毕赤酵母表达系统的应用 | 第19页 |
| 1.3 本研究的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料 | 第20-25页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.1 分子生物学试剂 | 第20页 |
| 2.2.2 化学试剂 | 第20-21页 |
| 2.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.4 溶液及配置 | 第21-24页 |
| 2.4.1 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第21页 |
| 2.4.2 诱导表达培养基相关溶液 | 第21-22页 |
| 2.4.3 耐高温α-淀粉酶酶活力测定相关溶液 | 第22-23页 |
| 2.4.4 SDS-PAGE相关溶液 | 第23-24页 |
| 2.4.5 其他溶液 | 第24页 |
| 2.5 培养基 | 第24-25页 |
| 3 方法 | 第25-38页 |
| 3.1 地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因amy的克隆及序列分析 | 第25-30页 |
| 3.1.1 地衣芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的基因 | 第26-27页 |
| 3.1.3 PCR产物的回收纯化 | 第27-28页 |
| 3.1.4 T-A克隆 | 第28-30页 |
| 3.1.5 耐高温α-淀粉酶基因amy L7的序列分析 | 第30页 |
| 3.2 耐高温α-淀粉酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第30-34页 |
| 3.2.1 耐高温α-淀粉酶基因表达载体的构建 | 第30-33页 |
| 3.2.2 耐高温α-淀粉酶基因的表达 | 第33-34页 |
| 3.3 重组酶的诱导表达、分离纯化及性质分析 | 第34-38页 |
| 3.3.1 重组酶的诱导表达 | 第34页 |
| 3.3.2 重组酶的分离纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.3 酶活力的测定 | 第35-36页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 3.3.6 耐高温α-淀粉酶酶学性质分析 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-51页 |
| 4.1 耐高温α-淀粉酶基因的克隆、序列分析 | 第38-44页 |
| 4.1.1 地衣芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 4.1.2 耐高温α-淀粉酶基因的扩增 | 第38-39页 |
| 4.1.3 阳性菌落的鉴定 | 第39页 |
| 4.1.4 序列分析 | 第39-41页 |
| 4.1.5 生物信息学分析 | 第41-44页 |
| 4.2 耐高温α-淀粉酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第44-48页 |
| 4.2.1 去信号肽的耐高温α-淀粉酶基因片段的扩增 | 第44页 |
| 4.2.2 酵母重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.3 重组质粒pPICZαA-amy L7的提取与鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.4 诱导表达及表达产物的SDS-PAGE | 第46-47页 |
| 4.2.5 蛋白质含量测定标准曲线的绘制 | 第47-48页 |
| 4.2.6 比活力和纯化倍数计算 | 第48页 |
| 4.3 耐高温α-淀粉酶的酶学性质 | 第48-51页 |
| 4.3.1 重组酶的最适反应温度 | 第48-49页 |
| 4.3.2 重组酶的最适反应pH | 第49页 |
| 4.3.3 重组酶的热稳定性 | 第49-50页 |
| 4.3.4 不同金属离子对重组酶的影响 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1 耐高温α-淀粉酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第51-52页 |
| 5.2 影响外源基因在毕赤酵母中高效表达的因素 | 第52-53页 |
| 5.3 重组蛋白酶的酶学性质分析 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
