| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-36页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第13页 |
| 1.2 文献综述 | 第13-35页 |
| 1.2.1 水稻籼粳亚种间的生殖隔离 | 第13-14页 |
| 1.2.2 籼粳杂种不育基因的定位 | 第14-16页 |
| 1.2.3 籼粳杂种不育基因的克隆 | 第16-17页 |
| 1.2.4 杂种不育的分子演化机制 | 第17-21页 |
| 1.2.5 籼粳杂种不育位点S5的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.6 植物天冬氨酸蛋白酶研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2.7 植物细胞壁研究进展 | 第25-32页 |
| 1.2.8 植物内质网胁迫 | 第32-34页 |
| 1.2.9 水稻花粉绒毡层程序性死亡 | 第34-35页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-46页 |
| 2.1 材料 | 第36-37页 |
| 2.1.1 植物材料和细胞系 | 第36页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第36-37页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 2.2.1 基因蛋白信息查询相关网站 | 第37-38页 |
| 2.2.2 酵母双杂交文库的筛选 | 第38-39页 |
| 2.2.3 烟草BY-2 稳定表达细胞系的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.4 植物细胞瞬时表达 | 第40页 |
| 2.2.5 组织切片染色 | 第40-41页 |
| 2.2.6 水稻DNA抽提和转基因植株阳性检测 | 第41页 |
| 2.2.7 水稻蛋白抽提和Western Blot | 第41-42页 |
| 2.2.8 利用原生质体确定膜拓扑结构 | 第42页 |
| 2.2.9 病菌接种和病斑测量 | 第42页 |
| 2.2.10 表达量以及OsbZIP50的检测 | 第42-43页 |
| 2.2.11 取样和转录组文库构建 | 第43页 |
| 2.2.12 数据分析 | 第43-44页 |
| 2.3 载体 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-90页 |
| 3.1 ORF3-5 互作蛋白的寻找 | 第46-52页 |
| 3.1.1 穗组织酵母双杂交文库的构建 | 第46页 |
| 3.1.2 酵母双杂交文库的筛选 | 第46-49页 |
| 3.1.3 ORF4+互作蛋白推测与验证 | 第49-52页 |
| 3.2 ORF4和ORF5稳定悬浮细胞系的构建与处理 | 第52-54页 |
| 3.3 ORF4和ORF5的共定位研究 | 第54-55页 |
| 3.4 ORF5在拟南芥中影响PR基因的表达 | 第55-56页 |
| 3.5 ORF5+的天冬氨酸蛋白酶活性位点诱变 | 第56-58页 |
| 3.6 Balilla，BalillaORF5+和BalillaORF3+ORF5+胚囊发育过程 | 第58-60页 |
| 3.7 败育胚囊MAPK6含量分析 | 第60页 |
| 3.8 ORF3+的功能研究 | 第60-61页 |
| 3.9 转录组数据分析 | 第61-80页 |
| 3.9.1 RNAseq文库的构建与测序 | 第61-62页 |
| 3.9.2 BL5+/BL差异表达基因分析 | 第62-67页 |
| 3.9.3 BL5+/BL中内质网胁迫和PCD相关基因分析 | 第67-68页 |
| 3.9.4 BL5+/BL中细胞壁重构相关基因分析 | 第68-70页 |
| 3.9.5 BL5+中纤维素的积累 | 第70-72页 |
| 3.9.6 BL5+中胼胝质的积累 | 第72-74页 |
| 3.9.7 BL5+/BL中驱动蛋白表达量变化分析 | 第74-75页 |
| 3.9.8 BL3+5+/BL差异表达基因分析 | 第75-78页 |
| 3.9.9 BL3+5+/BL5+差异表达基因分析 | 第78-80页 |
| 3.9.10 基于转录组分析推测的S5位点作用模式 | 第80页 |
| 3.10 ORF4功能研究 | 第80-90页 |
| 3.10.1 ORF4+的跨膜拓扑结构 | 第80-82页 |
| 3.10.2 ORF4+内吞位点分析 | 第82-84页 |
| 3.10.3 ORF4+影响株高和分蘖数 | 第84-85页 |
| 3.10.4 假病斑与胼胝质的积累 | 第85-86页 |
| 3.10.5 ORF4+的抗病性 | 第86-87页 |
| 3.10.6 ORF4+的敲除 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-96页 |
| 4.1 S5位点控制的胚囊败育是一个复杂的过程 | 第90-91页 |
| 4.2 ORF4和ORF5的表达模式与胚囊败育 | 第91页 |
| 4.3 S5诱导的PCD | 第91页 |
| 4.4 细胞壁相关基因与S5介导的胚囊败育 | 第91-92页 |
| 4.5 ORF5功能探讨 | 第92-93页 |
| 4.6 ORF4功能探讨 | 第93-94页 |
| 4.7 ORF3功能探讨 | 第94页 |
| 4.8 不同系统对S5筛选互作蛋白的影响 | 第94-95页 |
| 4.9 总结与展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-115页 |
| 附录 | 第115-138页 |
| 附录I 附表 | 第115-123页 |
| 附表 1 细胞壁相关基因的log2表达量变化 | 第115-119页 |
| 附表 2 Real-time PCR引物 | 第119-123页 |
| 附录II 部分实验的详细步骤 | 第123-137页 |
| Protocol 1 水稻原生质体瞬时表达 | 第123-125页 |
| Protocol 2 利用拟南芥悬浮细胞系做原生质体瞬时表达 | 第125-126页 |
| Protocol 3 苯酚-氯仿纯化获取高纯度质粒 | 第126-128页 |
| Protocol 4 转基因BY-2 悬浮细胞系的构建 | 第128-129页 |
| Protocol 5 植物组织石蜡切片 | 第129-132页 |
| Protocol 6 大肠杆菌感受态的制备 | 第132-133页 |
| Protocol 7 农杆菌感受态制备 | 第133-134页 |
| Protocol 8 酵母试剂配方 | 第134-135页 |
| Protocol 9 RNA抽提和反转录 | 第135-136页 |
| Protocol 10 SDs-PAGE和Western Blot配方 | 第136-137页 |
| 附录III 作者简介 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
