| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-45页 |
| 第一章 单核细胞增多性李斯特菌快速检测研究进展 | 第13-22页 |
| 1 免疫学快速检测方法 | 第13-14页 |
| 2 核酸检测方法 | 第14-15页 |
| 3 PCR检测方法 | 第15-19页 |
| 3.1 单一PCR检测 | 第15-16页 |
| 3.2 磁免疫PCR检测 | 第16-17页 |
| 3.3 巢式和半巢式PCR | 第17-18页 |
| 3.4 多重PCR检测 | 第18页 |
| 3.5 实时PCR检测 | 第18-19页 |
| 4 基因芯片技术 | 第19-22页 |
| 第二章 单核细胞增多性李斯特菌分子分型方法的研究与应用 | 第22-35页 |
| 1 LM的传统表型分型法 | 第22-23页 |
| 1.1 血清分型 | 第22-23页 |
| 1.2 噬菌体分型 | 第23页 |
| 1.3 多区带酶电泳分型(MEE) | 第23页 |
| 2 LM分子生物学分型 | 第23-32页 |
| 2.1 需要PCR扩增的分子分型 | 第24-28页 |
| 2.1.1 随机引物扩增DNA多态性分析分型 | 第24-25页 |
| 2.1.2 扩增片段长度多态性分析 | 第25-26页 |
| 2.1.3 单链构象多态性分析 | 第26-27页 |
| 2.1.4 多位点序列分型 | 第27-28页 |
| 2.2 无需PCR扩增的分型 | 第28-32页 |
| 2.2.1 核糖体分型 | 第28-29页 |
| 2.2.2 脉冲场凝胶电泳 | 第29-32页 |
| 3 单核细胞增多性李斯特菌分子分型法的应用 | 第32-35页 |
| 3.1 食源性疾病的监控和暴发的追踪 | 第32-33页 |
| 3.2 对不同致病性LM的区分及对其进化树特征的描述 | 第33-35页 |
| 4 结语 | 第35页 |
| 参考文献: | 第35-45页 |
| 第二部分 研究内容 | 第45-76页 |
| 第一章 三重PCR检测L. MONOCYTOGENES的灵敏性 | 第46-56页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| 1.1 菌株 | 第47页 |
| 1.2 培养基、试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 1.3 细菌DNA抽提 | 第48页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第48页 |
| 1.5 多重PCR反应 | 第48-49页 |
| 1.6 三重PCR检出LM的灵敏度和抗干扰性 | 第49页 |
| 1.7 三重PCR用于人工污染牛奶的灵敏性和抗干扰性试验 | 第49-50页 |
| 1.8 三重PCR直接从牛奶中检测低污染量LM的试验 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-53页 |
| 2.1 三重PCR结果 | 第50-51页 |
| 2.2 三重PCR检出LM的灵敏度和抗干扰性结果 | 第51-52页 |
| 2.3 三重PCR用于人工污染牛奶的灵敏性和抗干扰性试验结果 | 第52页 |
| 2.4 三重PCR直接从牛奶中检测低污染量LM的试验结果 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 第二章 基于ACTA基因的LISTERIA MONOCYTOGENES分离株分子分型研究 | 第56-64页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 细菌菌株 | 第57页 |
| 1.2 培养基、试剂与仪器 | 第57页 |
| 1.3 引物的设计与合成 | 第57页 |
| 1.4 模板DNA的提取 | 第57-58页 |
| 1.5 PCR条件 | 第58页 |
| 1.6 PCR产物纯化 | 第58页 |
| 1.7 序列测定 | 第58-59页 |
| 2 结果 | 第59页 |
| 2.1 PCR结果 | 第59页 |
| 2.2 ACTA基因序列及其同源性 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献: | 第62-64页 |
| 第三章 LISTERIA MONOCYTOGENES分离株PFGE分型研究 | 第64-76页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| 1.1 培养基、试剂、仪器与设备 | 第65页 |
| 1.2 细菌菌株 | 第65页 |
| 1.3 标准分子量的制备 | 第65-66页 |
| 1.4 细菌DNA的提取及样品栓的制备 | 第66页 |
| 1.5 限制性内切酶的消化 | 第66-67页 |
| 1.6 电泳 | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-70页 |
| 3 讨论 | 第70-74页 |
| 参考文献: | 第74-76页 |
| 附录1 培养基及试剂 | 第76-78页 |
| 1 培养基 | 第76-77页 |
| 2 试剂 | 第77-78页 |
| 附录2 L. MONOCYTOGENES 00174株ACTA基因部分碱基序列 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
