| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩写对照 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 α-淀粉酶的工业化应用与国内外研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1 α-淀粉酶概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 α-淀粉酶简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 α-淀粉酶的结构特点 | 第13页 |
| 1.1.3 α-淀粉酶分类及催化机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 α-淀粉酶的生产 | 第14页 |
| 1.2 α-淀粉酶的工业化应用 | 第14-17页 |
| 1.2.1 在面包烘焙工业中应用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 液化和糖化淀粉制作甜味剂 | 第15页 |
| 1.2.3 α-淀粉酶在液态法生产白酒上的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 纤维制造工艺中的应用 | 第16页 |
| 1.2.5 造纸工业上的应用 | 第16页 |
| 1.2.6 除垢剂中的应用 | 第16页 |
| 1.2.7 医药中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.8 饲料添加剂中的应用 | 第17页 |
| 1.3 α-淀粉酶国内外研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 国内α-淀粉酶类的生产和应用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 国外α-淀粉酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 2 易错 PCR（epPCR）技术的研究概况 | 第19-25页 |
| 2.1 定向进化技术的起源与发展 | 第19-20页 |
| 2.2 定向进化的基本方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 易错 PCR 技术（Error-pronf PCR） | 第20-21页 |
| 2.2.2 DNA 改组技术(DNA shuffling) | 第21-22页 |
| 2.2.3 交错延伸技术（staggered extension process, stEP） | 第22页 |
| 2.2.4 体外随机重组（random-priming in vitro recombination, RPR） | 第22-23页 |
| 2.2.5 基因家族间的同源重组 | 第23页 |
| 2.2.6 外显子改组技术 | 第23页 |
| 2.2.7 杂合酶技术 | 第23-24页 |
| 2.3 易错 PCR（epPCR）技术研究进展 | 第24-25页 |
| 3 本实验研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 试验研究 | 第27-62页 |
| 试验一 枯草芽孢杆菌菌株鉴定 | 第27-35页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 菌种 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.3 主要仪器及使用软件 | 第27页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第27-28页 |
| 1.5 试验方法 | 第28-30页 |
| 1.5.1 革兰氏染色法 | 第28页 |
| 1.5.2 芽孢染色 | 第28-29页 |
| 1.5.3 16S rDNA 的 PCR 扩增用引物设计 | 第29页 |
| 1.5.4 琼脂糖胶回收 | 第29页 |
| 1.5.5 体外连接体系及条件 | 第29页 |
| 1.5.6 转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| 1.5.7 转化后大肠杆菌质粒验证 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-34页 |
| 2.1 革兰氏染色鉴定结果 | 第30-31页 |
| 2.2 孔雀绿染色鉴定结果 | 第31页 |
| 2.3 枯草芽孢杆菌 16S rDNA 的克隆 | 第31页 |
| 2.4 PCR 产物回收 | 第31-32页 |
| 2.5 连接 T 载体 16S rDNA 菌落 PCR 验证 | 第32页 |
| 2.6 测序及比对结果 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 试验二 枯草芽孢杆菌淀粉酶基因的克隆及酶活性鉴定 | 第35-41页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 1.1 菌种 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第35页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第35页 |
| 1.4 试验方法 | 第35-38页 |
| 1.4.1 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第35-36页 |
| 1.4.2 枯草芽孢杆菌淀粉酶基因的扩增 | 第36页 |
| 1.4.3 克隆基因胶回收验证 | 第36页 |
| 1.4.4 胶回收淀粉酶基因连接 T 载体并验证 | 第36-37页 |
| 1.4.5 麦芽糖标准曲线的测定 | 第37页 |
| 1.4.6 枯草芽孢杆菌及缺陷株初始淀粉酶含量的测定 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-40页 |
| 2.1 提取的基因组检测 | 第38页 |
| 2.2 淀粉酶基因 PCR 扩增结果 | 第38页 |
| 2.3 淀粉酶基因胶回收验证 | 第38-39页 |
| 2.4 淀粉酶基因 T 连接载体转化大肠杆菌菌落 PCR 验证 | 第39页 |
| 2.5 麦芽糖标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| 2.6 枯草芽孢杆菌淀粉酶初始酶活性的测定 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 试验三 α-淀粉酶定向进化分析 | 第41-47页 |
| 1 材料与方法 | 第41页 |
| 1.1 样品 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.1 设置同比例不同浓度的 ATP、TTP、CTP、GTP | 第41页 |
| 2.2 设置不同浓度的 MnCl_2 | 第41-42页 |
| 2.3 设置不同比列的 ATP、TTP、CTP、GTP 及不同浓度的 MnCl_2 | 第42页 |
| 2.4 突变基因的连接转化 | 第42-43页 |
| 2.4.1 易错 PCR 基因的连接 | 第42页 |
| 2.4.2 连接载体的转化 | 第42页 |
| 2.4.3 连接转化的基因验证 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| 3.1 同比例不同浓度的 ATP、TTP、CTP、GTP 验证 | 第43-44页 |
| 3.2 设置不同浓度的 MnCl_2验证 | 第44页 |
| 3.3 不同比列的 ATP、TTP、CTP、GTP 及不同浓度的 MnCl_2验证 | 第44-45页 |
| 3.4 连接载体菌落 PCR 验证 | 第45页 |
| 3.5 连接载体双酶切验证 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 试验四 α-淀粉酶原核表达及突变酶活性分析 | 第47-58页 |
| 1 材料与方法 | 第47页 |
| 2 试剂与耗材 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.1 枯草芽孢杆菌α-淀粉酶的原核表达载体构建 | 第47-48页 |
| 3.2 原核表达载体淀粉酶活性的测定 | 第48-49页 |
| 3.3 原核表达载体淀粉酶最适温度的探究 | 第49页 |
| 3.4 原核表达载体淀粉酶最适 pH 的探究 | 第49页 |
| 3.5 易错 PCR 体系克隆的α-淀粉酶的原核表达载体构建 | 第49-51页 |
| 3.6 突变基因原核表达载体淀粉酶最适温度的探究 | 第51页 |
| 3.7 突变基因原核表达载体淀粉酶最适 pH 的探究 | 第51-52页 |
| 4 结果 | 第52-57页 |
| 4.1 pET32a 及 pGEM-T 淀粉酶基因双酶切 | 第52页 |
| 4.2 野生型淀粉酶基因表达载体菌液 PCR 验证 | 第52页 |
| 4.3 野生型淀粉酶基因单酶切及双酶切验证 | 第52-53页 |
| 4.4 野生型淀粉酶基因淀粉酶活性测定 | 第53页 |
| 4.5 野生型淀粉酶最适温度及最适 pH 值得探索 | 第53-54页 |
| 4.6 突变基因原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 4.7 台盼蓝法筛选到的高活性突变株 | 第54-55页 |
| 4.8 突变酶一最适温度及最适 pH 的探究 | 第55-56页 |
| 4.9 突变酶二最适温度及最适 pH 的探究 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-58页 |
| 试验五：α-淀粉酶野生型和突变型水解玉米粉效果的研究 | 第58-62页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| 1.1 材料与菌种 | 第58页 |
| 1.2 仪器与设备 | 第58页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 玉米粉预处理 | 第59页 |
| 2.2 支链淀粉- ConA 沉淀物和直链淀粉的测定 | 第59-60页 |
| 2.3 总淀粉的测定 | 第60页 |
| 2.4 直链淀粉含量的计算 | 第60页 |
| 3 试验结果 | 第60-61页 |
| 3.1 未作处理的玉米粉直链淀粉含量测定 | 第60页 |
| 3.2 野生型α-淀粉酶处理玉米粉直链淀粉含量测定 | 第60页 |
| 3.3 突变α-淀粉酶一处理玉米粉直链淀粉含量测定 | 第60-61页 |
| 3.4 突变α-淀粉酶二处理玉米粉直链淀粉含量测定 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第三章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第69页 |
