摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
1. 前言 | 第12-27页 |
1.1 昆虫触角感受器及嗅觉感受机制 | 第12-13页 |
1.2 昆虫性信息素 | 第13-15页 |
1.2.1 信息素的生物合成 | 第13-14页 |
1.2.2 性信息素成分 | 第14-15页 |
1.3 气味结合蛋白研究进展 | 第15-21页 |
1.3.1 性信息素结合蛋白的种类 | 第16-18页 |
1.3.2 性信息素结合蛋白的组织分布 | 第18页 |
1.3.3 性信息素结合蛋白的结合特性及功能 | 第18-19页 |
1.3.4 PBPs的构象及pH影响 | 第19-21页 |
1.4 昆虫化学感受蛋白(CSPs)研究近况 | 第21-22页 |
1.5 性信息素气味受体研究近况 | 第22-24页 |
1.6 豆野螟研究近况 | 第24-25页 |
1.7 本研究的目的及意义 | 第25-27页 |
2. 材料与方法 | 第27-38页 |
2.1 实验材料 | 第27-28页 |
2.1.1 实验昆虫 | 第27页 |
2.1.2 实验试剂 | 第27页 |
2.1.3 实验主要仪器 | 第27-28页 |
2.1.4 引物序列 | 第28页 |
2.2 实验方法 | 第28-38页 |
2.2.1 豆野螟各组织及整体材料的获取 | 第28-29页 |
2.2.2 豆野螟总RNA的提取 | 第29页 |
2.2.3 基因的获取 | 第29-31页 |
2.2.3.1 cDNA第一链的合成以及PCR扩增 | 第29页 |
2.2.3.2 PCR产物的回收 | 第29-30页 |
2.2.3.3 回收目的片段的连接 | 第30页 |
2.2.3.4 连接产物的转化 | 第30-31页 |
2.2.3.5 阳性检测 | 第31页 |
2.2.3.6 序列分析 | 第31页 |
2.2.4 MvitPBPs的组织及全虫表达分析 | 第31-32页 |
2.2.4.1 豆野螟各组织的RNA提取 | 第31-32页 |
2.2.4.2 Real-Time PCR检测相对表达量 | 第32页 |
2.2.5 Mv-BPs的原核表达及纯化 | 第32-36页 |
2.2.5.1 载体构建 | 第32-33页 |
2.2.5.2 重组质粒的检测 | 第33-34页 |
2.2.5.2.1 质粒的提取 | 第33页 |
2.2.5.2.2 重组质粒的双酶切验证 | 第33-34页 |
2.2.5.3 重组质粒PET32α(+)-PBPs的试表达 | 第34-35页 |
2.2.5.4 重组质粒PET32α(+)-PBPs的大量表达 | 第35页 |
2.2.5.5 重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
2.2.5.6 肠激酶酶切 | 第36页 |
2.2.6 荧光特性实验 | 第36-38页 |
3. 结果与分析 | 第38-53页 |
3.1 豆野螟MvitPBPs克隆及序列分析 | 第38-39页 |
3.1.1 豆野螟总RNA的提取 | 第38页 |
3.1.2 豆野螟MvitPBPs克隆与分析 | 第38-39页 |
3.2 多重序列比对、立体模型以及进化分析 | 第39-44页 |
3.3 MvitPBPs的组织和全虫表达水平分析 | 第44-45页 |
3.4 豆野螟重组蛋白pET32α(+)-PBPs诱导表达、纯化 | 第45-46页 |
3.5 荧光竞争结合实验 | 第46-53页 |
4. 讨论 | 第53-56页 |
参考文献 | 第56-66页 |
致谢 | 第66页 |