| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 马氏珠母贝简介 | 第10-14页 |
| 1.1.1 贝壳形成相关的生物矿化研究 | 第10-11页 |
| 1.1.2 外套膜的结构 | 第11-14页 |
| 1.2 miRNA简介 | 第14-21页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第14-15页 |
| 1.2.2 miRNA的生物学特点 | 第15页 |
| 1.2.3 miRNA的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.2.4 miRNA的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.5 miRNA的研究方法 | 第17-21页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 马氏珠母贝外套膜miRNA的筛选和验证 | 第22-37页 |
| 2.1 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.1.1 中央膜和边缘膜差异miRNA的筛选 | 第22页 |
| 2.1.2 实验用贝 | 第22页 |
| 2.1.3 质粒、载体和细胞 | 第22页 |
| 2.1.4 实验所需引物 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要试剂及设备 | 第23页 |
| 2.1.6 实验所需主要溶液、试剂配制方法 | 第23-24页 |
| 2.1.7 miRNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.1.8 mir-RACE获得mi RNA序列 | 第25-28页 |
| 2.1.9 miRNA边缘膜中央膜组织差异表达分析 | 第28-30页 |
| 2.2 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.2.1 筛选结果 | 第30-31页 |
| 2.2.2 mir-RACE模板与克隆条带分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 miRNA荧光定量结果分析 | 第32-34页 |
| 2.3 讨论 | 第34-37页 |
| 3 miRNA功能的研究 | 第37-44页 |
| 3.1 实验步骤 | 第37页 |
| 3.2 实验结果 | 第37-43页 |
| 3.2.1 荧光定量结果 | 第37-40页 |
| 3.2.2 SEM观察miRNA过表达效果 | 第40-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-44页 |
| 3.3.1 miRNA对贝壳形成的影响 | 第43-44页 |
| 4 马氏珠母贝外套膜miRNA靶点筛选和靶向关系验证 | 第44-66页 |
| 4.1 实验方法 | 第44-51页 |
| 4.1.1 靶点的筛选 | 第44页 |
| 4.1.2 靶基因目的片段载体的构建 | 第44-47页 |
| 4.1.3 靶位点突变载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.1.4 双荧光素酶系统实验验证miRNA对靶点的调控 | 第48-50页 |
| 4.1.5 荧光定量检测靶基因的表达量 | 第50-51页 |
| 4.1.6 NPY序列验证 | 第51页 |
| 4.1.7 miRNA过表达对靶基因的影响 | 第51页 |
| 4.2 结果与分析 | 第51-62页 |
| 4.2.1 靶点的筛选 | 第51-52页 |
| 4.2.2 miRNA过表达对靶基因的影响 | 第52-57页 |
| 4.2.3 目的片段载体构建结果 | 第57页 |
| 4.2.4 双荧光素酶实验 | 第57-62页 |
| 4.3 讨论 | 第62-66页 |
| 4.3.1 miRNA靶点的筛选 | 第62-63页 |
| 4.3.2 miRNA对贝类矿化的影响 | 第63页 |
| 4.3.3 miRNA对贝类免疫的影响 | 第63-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 导师简介 | 第78页 |
