| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-12页 |
| 1.1 谷氨酰胺转胺酶概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 谷氨酰胺转胺酶的催化特性、来源及活化机制 | 第7-8页 |
| 1.1.2 谷氨酰胺转胺酶的应用 | 第8页 |
| 1.2 分子改造提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性 | 第8-9页 |
| 1.2.1 链霉菌谷氨酰胺转胺酶的结构与功能 | 第8-9页 |
| 1.2.2 谷氨酰胺转胺酶热稳定性改造进展 | 第9页 |
| 1.3 酶分子热稳定性改造策略 | 第9-11页 |
| 1.3.1 定点突变提高酶分子的热稳定性 | 第10页 |
| 1.3.2 融合双亲短肽提高酶分子热稳定性 | 第10-11页 |
| 1.3.3 酶分子热稳定性改造的其他策略 | 第11页 |
| 1.4 研究意义 | 第11页 |
| 1.5 研究内容 | 第11-12页 |
| 第二章 材料与方法 | 第12-19页 |
| 2.1 材料 | 第12-13页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第12页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第12页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第12页 |
| 2.1.4 培养基 | 第12-13页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第13页 |
| 2.2 方法 | 第13-19页 |
| 2.2.1 分子生物学操作 | 第13-15页 |
| 2.2.2 TGase突变体的构建 | 第15-16页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞制备及转化方法 | 第16页 |
| 2.2.4 培养方法 | 第16页 |
| 2.2.5 TGase的纯化方法 | 第16-17页 |
| 2.2.6 分析方法 | 第17-19页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第19-33页 |
| 3.1 定点突变提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性 | 第19-23页 |
| 3.1.1 突变位点的确定 | 第19页 |
| 3.1.2 突变体的表达 | 第19-20页 |
| 3.1.3 饱和突变体热稳定性初筛 | 第20-21页 |
| 3.1.4 突变体的纯化及酶学性质测定 | 第21-22页 |
| 3.1.5 突变体热稳定性提高机制解析 | 第22-23页 |
| 3.2 融合双亲短肽提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性 | 第23-29页 |
| 3.2.1 不同的位置融合双亲短肽的质粒构建 | 第23-24页 |
| 3.2.2 突变体的表达与纯化 | 第24-25页 |
| 3.2.3 突变体酶学性质分析 | 第25-26页 |
| 3.2.4 突变体的二级结构分析 | 第26-27页 |
| 3.2.5 突变体N-SAP1扫描电镜分析 | 第27页 |
| 3.2.6 C端柔性增强对TGase酶热稳定性的影响 | 第27-29页 |
| 3.3 复合突变提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性 | 第29-33页 |
| 3.3.1 复合突变位点确定 | 第29页 |
| 3.3.2 复合突变体的表达及纯化 | 第29-30页 |
| 3.3.3 复合突变体酶学性质分析 | 第30-31页 |
| 3.3.4 复合突变体热稳定性提高机制分析 | 第31-33页 |
| 主要结论与展望 | 第33-35页 |
| 主要结论 | 第33页 |
| 展望 | 第33-35页 |
| 致谢 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第41页 |