| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 新城疫反向遗传操作研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 新城疫病毒形态结构及分子生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 NDV的安全性评价 | 第13页 |
| 1.1.3 NDV的反向遗传学技术 | 第13-14页 |
| 1.1.4 新城疫的反向遗传系统的组成 | 第14-16页 |
| 1.1.5 NDV作为疫苗载体的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2 鸭病毒性肝炎疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第19页 |
| 1.2.2 弱毒疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2.3 基因工程疫苗 | 第20-21页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-47页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞及实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-47页 |
| 2.2.1 1型、3型DHAV VP1基因的连接 | 第24-30页 |
| 2.2.2 表达DHAV 1VP1-2A-3VP1重组新城疫病毒的构建 | 第30-37页 |
| 2.2.3 重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1的拯救 | 第37-40页 |
| 2.2.4 HA和HI的测定 | 第40页 |
| 2.2.5 重组病毒的RT-PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.6 重组病毒的电镜观察 | 第41-42页 |
| 2.2.7 间接免疫荧光试验（IFA） | 第42页 |
| 2.2.8 重组病毒滴定、致病性及生长动力学检测 | 第42-44页 |
| 2.2.9 种鸭免疫试验 | 第44-45页 |
| 2.2.10 Western blot | 第45-47页 |
| 3 结果和分析 | 第47-55页 |
| 3.1 1型、3型DHAV VP1基因的连接 | 第47-48页 |
| 3.1.1 SOE-PCR连接DHAV-1VP1-2A和DHAV-3VP1 | 第47页 |
| 3.1.2 质粒pT-1VP1-2A-3VP1的提取和酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2 表达DHAV-1VP1-2A-3VP1重组新城疫病毒的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.1 PCR线性化新城疫病毒载体 | 第48-49页 |
| 3.2.2 线性化新城疫载体的病毒纯化 | 第49页 |
| 3.2.3 In-Fusion连接反应 | 第49页 |
| 3.2.4 重组质粒p LS-1VP1-2A-3VP1的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3 重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1的拯救 | 第50-51页 |
| 3.4 重组病毒的RT-PCR鉴定 | 第51页 |
| 3.5 病毒滴定、致病性及生长动力学检测 | 第51-52页 |
| 3.6 电镜观察 | 第52-53页 |
| 3.7 IFA鉴定 | 第53页 |
| 3.8 重组病毒免疫种鸭血清中DHAV-1 和DHAV-3 抗体的检测 | 第53-54页 |
| 3.9 Western blot鉴定 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 4.1 重组新城疫病毒的拯救 | 第55-56页 |
| 4.2 种鸭免疫试验 | 第56页 |
| 4.3 重组NDV构建的改善 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-63页 |
| 7 致谢 | 第63页 |
