| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 鸡球虫概述 | 第15-20页 |
| 1.1.1 鸡球虫形态特点与生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.1.2 鸡球虫的生活史 | 第16-19页 |
| 1.1.3 鸡球虫入侵机制研究 | 第19-20页 |
| 1.2 鸡球虫免疫原性研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.1 不同种类的球虫免疫原性不同 | 第20页 |
| 1.2.2 球虫各发育阶段的免疫原性不同 | 第20-21页 |
| 1.3 抗鸡球虫感染免疫保护机理研究 | 第21-26页 |
| 1.3.1 抗体在鸡球虫免疫中的作用 | 第22-23页 |
| 1.3.2 T淋巴细胞在鸡球虫保护性免疫中的作用 | 第23页 |
| 1.3.3 细胞因子在鸡球虫保护性免疫中的作用 | 第23-25页 |
| 1.3.4 肠道粘膜免疫 | 第25-26页 |
| 1.4 鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白的研究 | 第26-28页 |
| 1.5 球虫其他表面抗原的研究 | 第28-29页 |
| 1.6 鸡球虫疫苗的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.6.1 第一代球虫疫苗 | 第29页 |
| 1.6.2 第二代球虫疫苗 | 第29-30页 |
| 1.6.3 第三代疫苗 | 第30-32页 |
| 1.6.3.1 DNA疫苗 | 第30页 |
| 1.6.3.2 活载体疫苗的研究 | 第30-31页 |
| 1.6.3.3 重组亚单位疫苗 | 第31-32页 |
| 1.7 佐剂提高抗原免疫原性的研究 | 第32-33页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-51页 |
| 2.1 材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 寄生虫株、试验菌株与载体 | 第35页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第35页 |
| 2.1.3 主要试剂与药品 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第36页 |
| 2.2 试验方法 | 第36-50页 |
| 2.2.1 对基因序列的分析 | 第36页 |
| 2.2.2 试剂的配制 | 第36-37页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第37页 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫总RNA的提取及目的基因的PCR扩增 | 第37-39页 |
| 2.2.4.1 总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.4.2 目的基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.5 目的基因的克隆与测序 | 第39-41页 |
| 2.2.5.1 分别克隆Et MIC2、Et AMA1和Et MIC3基因至p UC57载体 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.6 原核蛋白质诱导表达、验证及纯化 | 第41-46页 |
| 2.2.6.1 蛋白质诱导表达 | 第41页 |
| 2.2.6.2 SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况 | 第41-42页 |
| 2.2.6.3 Western blot分析重组蛋白表达情况 | 第42-43页 |
| 2.2.6.4 IFA检测重组蛋白M2-A1-M3多克隆抗体 | 第43-45页 |
| 2.2.6.5 可溶蛋白质的处理 | 第45页 |
| 2.2.6.6 包涵体蛋白质的处理 | 第45页 |
| 2.2.6.7 蛋白质纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.6.8 蛋白质浓度测定 | 第46页 |
| 2.2.7 亚单位疫苗制备 | 第46页 |
| 2.2.8 免疫和感染实验动物 | 第46-47页 |
| 2.2.9 免疫保护力评价 | 第47-49页 |
| 2.2.9.1 增重效果评价 | 第47-48页 |
| 2.2.9.2 盲肠病变值（LS）与判定指标 | 第48页 |
| 2.2.9.3 卵囊数计算与换算标准 | 第48-49页 |
| 2.2.9.4 抗球虫指数（ACI） | 第49页 |
| 2.2.10 免疫指标的评价 | 第49-50页 |
| 2.2.10.1 血清抗体和粘膜抗体水平检测 | 第49页 |
| 2.2.10.2 鸡淋巴细胞增殖试验 | 第49-50页 |
| 2.2.10.3 淋巴细胞亚群检测 | 第50页 |
| 2.3 统计分析 | 第50-51页 |
| 3 试验结果 | 第51-67页 |
| 3.1 相关目的基因序列的分析及基因克隆 | 第51-54页 |
| 3.1.1 目的基因序列的分析 | 第51-52页 |
| 3.1.2 目的基因多表位片段的克隆及载体构建 | 第52-54页 |
| 3.2 重组蛋白的表达鉴定及浓度测定 | 第54-59页 |
| 3.2.1 重组蛋白SDS-PAGE及Western blot鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2.2 重组蛋白IFA鉴定 | 第55-58页 |
| 3.2.3 重组蛋白M2-A1-M3浓度测定 | 第58-59页 |
| 3.3 免疫保护效果评价 | 第59-63页 |
| 3.3.1 体重增长 | 第59-60页 |
| 3.3.2 盲肠病变计分 | 第60-61页 |
| 3.3.3 卵囊排出 | 第61页 |
| 3.3.4 抗球虫指数（ACI） | 第61-63页 |
| 3.4 免疫指标的评价 | 第63-67页 |
| 3.4.1 血清特异性抗体水平检测 | 第63页 |
| 3.4.2 粘膜特异性抗体水平检测 | 第63-64页 |
| 3.4.3 外周血T淋巴细胞增值试验 | 第64-65页 |
| 3.4.4 CD4~+和CD8~+T淋巴细胞亚群的检测结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
