| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-31页 |
| 1.1 抗坏血酸研究进展 | 第16-25页 |
| 1.1.1 抗坏血酸的生物合成途径 | 第17-19页 |
| 1.1.2 抗坏血酸合成的调控研究 | 第19-22页 |
| 1.1.2.1 环境因素对抗坏血酸的调控 | 第19页 |
| 1.1.2.2 碳骨架供应对抗坏血酸的调节 | 第19页 |
| 1.1.2.3 合成途径中相关基因对抗坏血酸的调节 | 第19-21页 |
| 1.1.2.4 GGP基因翻译水平对抗坏血酸的调节 | 第21页 |
| 1.1.2.5 其它影响到抗坏血酸合成的基因 | 第21-22页 |
| 1.1.3 抗坏血酸的功能 | 第22-25页 |
| 1.1.3.1 抗坏血酸是重要的抗氧化物质 | 第22-23页 |
| 1.1.3.2 抗坏血酸调节细胞分裂 | 第23-24页 |
| 1.1.3.3 抗坏血酸调控细胞延伸 | 第24-25页 |
| 1.2 低温和病原菌对植物的影响 | 第25-27页 |
| 1.2.1 低温对植物的影响 | 第25页 |
| 1.2.2 病原菌对植物的影响 | 第25-27页 |
| 1.3 植物活性氧的产生及清除 | 第27-30页 |
| 1.3.1 植物活性氧的产生 | 第28页 |
| 1.3.2 植物活性氧的清除 | 第28-30页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 材料的培养和处理 | 第31-32页 |
| 2.1.3 菌株与载体 | 第32页 |
| 2.1.4 生化试剂及各种酶 | 第32页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-58页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.2 反转录合成cDNA第一条链 | 第35页 |
| 2.2.3 番茄SlGGP-LIKE基因的分离与克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.4 目的片段回收 | 第36-37页 |
| 2.2.5 真核表达载体的构建 | 第37-41页 |
| 2.2.5.1 连接反应 | 第37页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.5.3 大肠杆菌转化及克隆筛选 | 第38页 |
| 2.2.5.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.5.5 正、反义表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.5.6 根癌农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.2.5.7 冻融法农杆菌转化 | 第40-41页 |
| 2.2.6 SlGGP-LIKE亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 2.2.6.1 SlGGP-LIKE的GFP载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.6.2 pBI121-SlGGP-LIKE-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第42页 |
| 2.2.7 SlGGP-LIKE蛋白的原核诱导及纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 SlGGP-LIKE原核载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.7.2 SlGGP-LIKE蛋白的原核诱导 | 第43页 |
| 2.2.7.3 抗体的制备 | 第43页 |
| 2.2.8 Western blot分析 | 第43-46页 |
| 2.2.8.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2.2.8.2 电转膜仪转膜 | 第44-45页 |
| 2.2.8.3 免疫反应 | 第45-46页 |
| 2.2.8.4 显色反应 | 第46页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的番茄转化 | 第46-48页 |
| 2.2.10 农杆菌介导的烟草转化 | 第48-49页 |
| 2.2.11 转基因植株的鉴定 | 第49-51页 |
| 2.2.11.1 CTAB微量法基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.2.11.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第50页 |
| 2.2.11.3 转基因植株的RT-qPCR的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.11.4 蛋白水平的鉴定 | 第51页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR | 第51页 |
| 2.2.13 转基因番茄生理指标的测定 | 第51-58页 |
| 2.2.13.1 抗坏血酸含量的测定 | 第51-52页 |
| 2.2.13.2 P700的 820nm光吸收 | 第52页 |
| 2.2.13.3 叶黄素循环色素组分分析 | 第52页 |
| 2.2.13.4 植物总蛋白的提取和Western blot分析 | 第52-53页 |
| 2.2.13.5 H_2O_2和O_2~(·?)的染色分析和定量测定 | 第53-54页 |
| 2.2.13.6 叶片台盼蓝染色分析 | 第54-55页 |
| 2.2.13.7 电解质外渗和膜脂过氧化程度的测定 | 第55页 |
| 2.2.13.8 APX活性的测定 | 第55-56页 |
| 2.2.13.9 净光合速率的测定 | 第56页 |
| 2.2.13.10 叶绿素荧光参数的测定 | 第56页 |
| 2.2.13.11 叶绿素含量测定 | 第56页 |
| 2.2.13.12 D1蛋白的提取和Western blot分析 | 第56-57页 |
| 2.2.13.13 病原菌处理的测定 | 第57页 |
| 2.2.13.14 数据处理及统计分析 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-86页 |
| 3.1 SlGGP-LIKE基因的分离及其特征 | 第58-61页 |
| 3.1.1 SlGGP-LIKE基因全长cDNA序列的克隆 | 第58页 |
| 3.1.2 SlGGP-LIKE基因的序列分析及其蛋白质序列分析 | 第58-61页 |
| 3.2 SlGGP-LIKE-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第61页 |
| 3.3 SlGGP-LIKE蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第61-62页 |
| 3.4 SlGGP-LIKE基因在番茄中的表达分析 | 第62-64页 |
| 3.4.1 SlGGP-LIKE基因在番茄不同组织器官中的表达 | 第62-63页 |
| 3.4.2 SlGGP-LIKE基因在不同逆境胁迫下的表达分析 | 第63-64页 |
| 3.5 SlGGP-LIKE基因在番茄中的遗传转化 | 第64-67页 |
| 3.5.1 SlGGP-LIKE基因反义表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 3.5.2 SlGGP-LIKE基因转基因番茄的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.5.3 抑制SlGGP基因的表达影响L-半乳糖合成途径中其它相关酶基因的表达 | 第66-67页 |
| 3.6 抑制SlGGP-LIKE基因表达降低了转基因番茄的低温抗性 | 第67-77页 |
| 3.6.1 低温胁迫下转基因番茄幼苗及成苗的生长情况 | 第67-68页 |
| 3.6.2 抑制SlGGP-LIKE基因表达降低转基因番茄耐低温机理分析 | 第68-77页 |
| 3.6.2.1 抑制SlGGP-LIKE基因表达降低了转基因番茄中的抗坏血酸含量 | 第68-69页 |
| 3.6.2.2 抑制SlGGP-LIKE基因表达影响转基因番茄的APX的酶活 | 第69-70页 |
| 3.6.2.3 抑制SlGGP-LIKE基因表达提高了转基因番茄中ROS的积累 | 第70-71页 |
| 3.6.2.4 抑制SlGGP-LIKE基因表达降低了低温胁迫下转基因番茄的生物膜的稳定性 | 第71-73页 |
| 3.6.2.5 抑制SlGGP-LIKE基因表达加剧了低温胁迫下转基因番茄光系统的光抑制 | 第73-74页 |
| 3.6.2.6 抑制SlGGP-LIKE基因表达对低温胁迫下转基因番茄D1蛋白的影响 | 第74-75页 |
| 3.6.2.7 抑制SlGGP-LIKE基因表达降低了转基因番茄叶黄素循环效率 | 第75页 |
| 3.6.2.8 抑制SlGGP-LIKE基因表达增强了转基因番茄对丁香假单胞菌的抗性 | 第75-77页 |
| 3.7 SlGGP-LIKE基因在烟草中的遗传转化 | 第77-86页 |
| 3.7.1 过表达SlGGP-LIKE基因烟草的获得和鉴定 | 第77-78页 |
| 3.7.2 过表达SlGGP-LIKE基因增强了转基因烟草的抗氧化胁迫能力 | 第78-86页 |
| 3.7.2.1 氧化胁迫下转基因烟草幼苗生长情况 | 第78-79页 |
| 3.7.2.2 过表达SlGGP-LIKE基因增强了转基因烟草成苗的抗氧化胁迫能力 | 第79-80页 |
| 3.7.2.3 过表达SlGGP-LIKE提高了转基因烟草的抗坏血酸含量 | 第80-81页 |
| 3.7.2.4 过表达SlGGP-LIKE的转基因烟草维持较高的APX酶活性 | 第81-83页 |
| 3.7.2.5 过表达SlGGP-LIKE基因提高了转基因烟草在氧化胁迫下的生物膜的稳定性 | 第83页 |
| 3.7.2.6 过表达SlGGP-LIKE基因缓解了转基因烟草MV胁迫下的PSII的光抑制 | 第83-85页 |
| 3.7.2.7 过表达SlGGP-LIKE基因提高了转基因烟草叶黄素循环效率 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-92页 |
| 4.1 SlGGP-LIKE基因编码一个细胞核定位的GDP-L-半乳糖磷酸酶 | 第87-88页 |
| 4.2 抑制SlGGP-LIKE基因的表达降低了转基因番茄的低温抗性 | 第88-89页 |
| 4.3 抑制SlGGP-LIKE基因增强了转基因番茄的病原菌抗性 | 第89-90页 |
| 4.4 过表达SlGGP-LIKE基因增强了转基因烟草的抗氧化胁迫的能力 | 第90-91页 |
| 4.5 SlGGP-LIKE在低温胁迫中的作用机制 | 第91-92页 |
| 5 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第105页 |
