| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表(Abbreviations) | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 猪增生性肠炎概述 | 第12-18页 |
| ·病原学及其研究进展 | 第12-13页 |
| ·病原的分类及其结构特征 | 第12-13页 |
| ·致病机理 | 第13页 |
| ·流行病学及其研究进展 | 第13-14页 |
| ·易感动物和传染源 | 第13-14页 |
| ·地理分布及传播途径 | 第14页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第14-16页 |
| ·诊断方法 | 第16-18页 |
| ·组织病理学诊断 | 第16-17页 |
| ·血清学诊断法 | 第17页 |
| ·分子生物学诊断 | 第17页 |
| ·FIRSTtest试剂盒诊断 | 第17-18页 |
| ·防治措施 | 第18页 |
| 2 环介导等温扩增技术 | 第18-22页 |
| ·技术特点 | 第19页 |
| ·技术原理 | 第19-21页 |
| ·引物设计原则 | 第21-22页 |
| ·LAMP反应体系 | 第22页 |
| 3 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 胞内劳森氏菌检测方法的建立 | 第23-52页 |
| 1 实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24页 |
| ·相关试剂配制 | 第24-25页 |
| 2 质粒模版的制备 | 第25-26页 |
| ·胞内劳森氏菌质粒的制备 | 第25-26页 |
| ·胞内劳森氏菌质粒浓度测定 | 第26页 |
| ·粪便样品DNA的制备 | 第26页 |
| ·其他细菌及病毒DNA或RNA的制备 | 第26页 |
| 3 胞内劳森氏菌检测方法的建立 | 第26-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·引物的验证 | 第27-28页 |
| ·LAMP引物的验证 | 第27-28页 |
| ·LAMP结果判定 | 第28页 |
| ·PCR引物的验证 | 第28页 |
| ·PCR结果判定 | 第28页 |
| ·PCR产物克隆测序鉴定 | 第28-31页 |
| ·PCR扩增片段的胶回收 | 第29页 |
| ·重组质粒的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法)及重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·测序鉴定 | 第31页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第31-32页 |
| ·反应温度的优化 | 第31页 |
| ·反应时间的优化 | 第31-32页 |
| ·内外引物比例的优化 | 第32页 |
| ·dNTP浓度的优化 | 第32页 |
| ·镁离子浓度的优化 | 第32页 |
| ·甜菜碱的作用 | 第32页 |
| ·PCR检测方法条件的优化 | 第32页 |
| ·灵敏度试验 | 第32-33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·稳定性试验 | 第33页 |
| ·临床应用试验 | 第33-34页 |
| ·临床样本的采集 | 第33页 |
| ·临床样本的检测 | 第33页 |
| ·临床样本的复核检测 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-47页 |
| ·质粒模版测序以及浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·引物验证结果 | 第35页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第35-41页 |
| ·反应温度的优化 | 第35-36页 |
| ·反应时间的优化 | 第36-37页 |
| ·内外引物浓度比例的优化 | 第37-38页 |
| ·dNTP浓度的优化 | 第38-39页 |
| ·镁离子浓度的优化 | 第39-40页 |
| ·甜菜碱的作用 | 第40-41页 |
| ·LAMP反应条件的确立 | 第41-42页 |
| ·胞内劳森氏菌LAMP可视化检测 | 第42-43页 |
| ·PCR反应条件的优化及条件的确立 | 第43-44页 |
| ·灵敏性试验 | 第44-45页 |
| ·特异性试验 | 第45页 |
| ·稳定性试验 | 第45-46页 |
| ·临床样本检测 | 第46页 |
| ·FISRTtest~(TM)试剂盒检测 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-52页 |
| ·胞内劳森氏菌质粒模版的制备 | 第47页 |
| ·建立方法的分析 | 第47-48页 |
| ·反应条件对LAMP的影响 | 第48-49页 |
| ·反应温度对LAMP反应的影响 | 第48页 |
| ·内外引物比例对LAMP反应的影响 | 第48页 |
| ·镁离子浓度对LAMP反应的影响 | 第48-49页 |
| ·反应时间对LAMP反应的影响 | 第49页 |
| ·其他条件对LAMP反应的影响 | 第49页 |
| ·假阳性分析及应对措施 | 第49-50页 |
| ·临床样本分析 | 第50-52页 |
| 第三章 实验创新点及结论 | 第52-53页 |
| 1 实验创新点 | 第52页 |
| 2 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第60页 |