| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·苦荞麦简述 | 第11-12页 |
| ·苦荞麦的栽培与分布 | 第11页 |
| ·苦荞麦的营养价值及应用 | 第11-12页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂研究进展 | 第12-13页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂分类 | 第12页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂作用机理 | 第12-13页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的应用 | 第13页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂研究现状 | 第13-18页 |
| ·苦荞麦中胰蛋白酶抑制剂类型 | 第14页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的结构及理化性质研究进展 | 第14-16页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的生物功能 | 第16-17页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制分子生物学研究进展 | 第17-18页 |
| ·目前存在的问题和研究前景 | 第18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 实验材料 | 第19-22页 |
| ·材料、质粒和菌株 | 第19页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第19-20页 |
| ·实验用的主要试剂和溶液 | 第20-22页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液 | 第20-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| 3 实验方法 | 第22-36页 |
| ·苦荞麦基因组DNA的提取与检测 | 第22-24页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因的获得 | 第24-27页 |
| ·PCR扩增FtTI基因 | 第24页 |
| ·扩增产物检测验证和PCR纯化 | 第24-25页 |
| ·连接pMD19-T | 第25-26页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第26页 |
| ·筛选和鉴定阳性克隆 | 第26-27页 |
| ·提取阳性菌株质粒获得定点突变的模板 | 第27页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因的定点突变 | 第27-30页 |
| ·突变引物的设计 | 第27-28页 |
| ·PCR反应 | 第28页 |
| ·PCR产物的连接化 | 第28-29页 |
| ·突变体质粒转化DH5α和阳性菌株筛选 | 第29页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·表达载体构建 | 第30-32页 |
| ·制备pET-32a(+)-aFtTI/BL21(DE3)重组表达质粒 | 第30-31页 |
| ·转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态 | 第31页 |
| ·阳性转化子鉴定 | 第31-32页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·pET-32a(+)-aFtTI/BL21(DE3)的诱导表达 | 第32页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌表达产物的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·表达产物纯化 | 第33-34页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34页 |
| ·抑制活力和抑制常数的测定 | 第34-35页 |
| ·胰蛋白酶活性测定 | 第34页 |
| ·胰蛋白酶抑制活性测定 | 第34-35页 |
| ·抑制作用的动力学参数测定 | 第35页 |
| ·pH和温度对抑制剂活性的影响 | 第35-36页 |
| ·pH对抑制剂活性的影响 | 第35-36页 |
| ·温度对抑制剂活性的影响 | 第36页 |
| ·抑制剂的钝化作用 | 第36页 |
| ·抑制剂的高温高压处理 | 第36页 |
| ·抑制剂的超声波处理 | 第36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-48页 |
| ·荞麦胰蛋白酶抑制剂基因获得 | 第36-38页 |
| ·荞麦基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·FtTI基因的扩增 | 第37页 |
| ·菌落PCR和序列测定 | 第37-38页 |
| ·定点突变 | 第38-41页 |
| ·未突变FtTI基因的质粒提取 | 第38-39页 |
| ·定点突变PCR | 第39-40页 |
| ·DNA测序 | 第40-41页 |
| ·表达与纯化 | 第41-43页 |
| ·表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·突变胰蛋白酶抑制剂基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·抑制活力和抑制常数测定 | 第43页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂性质分析 | 第43-45页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的热稳定性 | 第43-44页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的pH值稳定性 | 第44-45页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的高温高压和超声波处理 | 第45页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂结构分析 | 第45-48页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的二级结构预测 | 第45页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂疏水性分析 | 第45-46页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的三维结构预测分析 | 第46-47页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂三维结构分析 | 第47-48页 |
| 5 讨论 | 第48-51页 |
| ·载体构建和大肠杆菌表达 | 第48-50页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂的突变位点分析 | 第50-51页 |
| ·研究展望 | 第51页 |
| 结论与创新点 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |