奶牛布鲁氏菌的PCR检测与分子分型研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 布鲁氏菌的病原生物学 | 第11-14页 |
| ·布鲁氏菌的种型特性 | 第11页 |
| ·布鲁氏菌的抗原结构 | 第11-12页 |
| ·毒力 | 第12页 |
| ·布鲁氏菌的变异 | 第12-13页 |
| ·布鲁氏菌抵抗力和致病力 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| 2 布鲁氏菌的分子生物学 | 第14-18页 |
| ·DNA 同源性分析 | 第14-15页 |
| ·布鲁氏菌主要外膜蛋白 | 第15-16页 |
| ·布鲁氏菌 DNA 的多态性研究 | 第16-18页 |
| ·DNA 限制性内切酶图谱分析 | 第18页 |
| 3 分类研究 | 第18-19页 |
| 4 诊断研究 | 第19-24页 |
| ·血清学检测 | 第19-21页 |
| ·PCR 检测 | 第21-23页 |
| ·核酸探针检测 | 第23-24页 |
| 5 布病研究的突破方向 | 第24-25页 |
| 第二部分 研究内容 | 第25-63页 |
| 第一章 金华地区奶牛布鲁氏菌的分离鉴定 | 第25-37页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·奶牛布鲁氏菌普检 | 第25-26页 |
| ·病料采集与筛选 | 第26-27页 |
| ·分离培养 | 第27-28页 |
| ·染色鉴定 | 第28页 |
| ·生化试验 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29-35页 |
| ·奶牛布鲁氏菌普检 | 第29页 |
| ·病料采集 | 第29页 |
| ·细菌分离培养 | 第29-31页 |
| ·染色鉴定 | 第31-32页 |
| ·生化试验 | 第32-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 奶样中布鲁氏菌套式PCR 检测方法的建立 | 第37-48页 |
| 1 材料与方法 | 第38-42页 |
| ·菌株和奶样 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·细菌培养 | 第38页 |
| ·用 PCR 方法鉴定可疑菌株 | 第38-40页 |
| ·牛奶样品中布鲁氏菌套式 PCR 检测方法的建立 | 第40-42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| ·引物筛选与 PCR 反应体系建立 | 第42页 |
| ·细菌 DNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·套式 PCR 引物的特异性 | 第43-44页 |
| ·可疑菌株的 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·套式 PCR 扩增的敏感性 | 第45-46页 |
| ·临床牛奶样品的套式 PCR 检测 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 布鲁氏菌分子分型初步研究 | 第48-63页 |
| 1 材料和方法 | 第49-55页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·引物设计 | 第49-50页 |
| ·染色体 DNA 的提取 | 第50页 |
| ·PCR 扩增 | 第50-53页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第53页 |
| ·连接 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备(CaC12法) | 第54页 |
| ·转化 | 第54页 |
| ·重组菌鉴定 | 第54页 |
| ·序列测定 | 第54-55页 |
| ·序列分析 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-60页 |
| ·omp2 基因分型 | 第55-59页 |
| ·AMOS-PCR 的分型 | 第59-60页 |
| ·rpoB 基因分型 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 A 溶液与试剂配方 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
