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鸭瘟病毒gH、TK、UL24基因的克隆与病毒转移质粒的构建

摘要第1-4页
 Abstract第4-9页
第一章 文献综述第9-24页
   ·鸭病毒性肠炎研究进展第9-17页
     ·DEV 的历史及分类地位第9页
     ·DEV 的特点第9-11页
     ·DEV 理化特点及生物学特性第11-12页
     ·DVE 的流行病学第12页
     ·DVE 的症状第12-13页
     ·DVE 的诊断第13-14页
     ·DVE 的防制第14-15页
     ·DEV 分子生物学研究进展第15-16页
     ·存在的问题与展望第16-17页
   ·重组禽α疱疹病毒的研究进展第17-24页
     ·禽α疱疹病毒的分子生物学特性第17-18页
     ·重组禽α疱疹病毒的构建第18-21页
     ·重组禽α疱疹病毒的应用第21-23页
     ·展望第23-24页
第二章 实验研究第24-71页
 实验一 鸭瘟病毒gH,TK 和UL24 基因的克隆和序列分析第24-46页
   ·材料第25页
     ·质粒载体、工程菌和试验毒株第25页
     ·酶和其他试剂、器材第25页
     ·鸡胚第25页
     ·常用缓冲液及培养基配置第25页
   ·方法第25-31页
     ·CEF 制备第25-26页
     ·DEV 病毒的繁殖第26页
     ·病毒基因组的提取第26页
     ·鸭瘟弱毒基因组gH、TK、UL24 基因的分段及全片段PCR 扩增第26-28页
     ·鸭瘟弱毒基因组gH-TK-UL24 基因片段的克隆第28-31页
   ·结果第31-44页
     ·鸭瘟弱毒基因组gH、TK、UL24 基因的PCR 扩增第31页
     ·DEV gH-TK-UL24 PCR 产物克隆及酶切鉴定第31-32页
     ·序列分析第32-41页
     ·遗传进化树第41-44页
   ·讨论第44-46页
 实验二 鸭瘟病毒强弱毒株TK 基因的克隆及序列比较分析第46-55页
   ·材料第47页
     ·质粒载体、工程菌和试验毒株第47页
     ·酶和试剂第47页
   ·方法第47-49页
     ·病毒增殖第47页
     ·病毒基因组的提取第47-48页
     ·引物的设计与合成第48页
     ·鸭瘟强弱毒基因组TK 基因的PCR 扩增第48页
     ·PCR 产物的纯化及克隆第48页
     ·重组质粒鉴定第48-49页
     ·序列比较分析第49页
   ·结果第49-53页
     ·TK 基因的PCR 扩增第49-50页
     ·重组质粒的PCR 及酶切鉴定第50-51页
     ·鸭瘟病毒TK-UL24 基因序列分析第51-53页
   ·讨论第53-55页
 实验三 鸭瘟病毒转移质粒的构建第55-70页
   ·材料第56-57页
     ·质粒载体、工程菌第56页
     ·细胞和病毒第56页
     ·工具酶及主要试剂第56页
     ·常用缓冲液及培养基配置第56-57页
   ·方法(转移载体的构建见图4.2)第57-64页
     ·TK 基因的亚克隆和鉴定第57-59页
     ·GFP 基因真核表达盒的构建第59-60页
     ·GFP1;GFP2;GFP3 基因真核表达盒的克隆第60-61页
     ·质粒DNA 的制备及纯化第61-62页
     ·DEV 病毒的繁殖及基因组DNA 的提取第62-63页
     ·鸭胚成纤维细胞(DEF),鸭胚肾细胞(DEK)单层细胞的制备第63页
     ·转染第63-64页
   ·结果第64-68页
     ·TK 基因的亚克隆和鉴定第64-65页
     ·Pcmv-GFP-polyA 基因片段的PCR 扩增第65页
     ·GFP3 基因片段的T 载体克隆与鉴定第65-66页
     ·GFP 基因真核表达盒的克隆与鉴定第66页
     ·转染第66-68页
   ·讨论第68-70页
 结论第70-71页
参考文献第71-80页
附录A 常用缓冲液及溶液配制第80-89页
作者简介第89页
攻读硕士期间发表的论文第89页

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