中文摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
第一章 文献综述 | 第8-32页 |
1. 禽流感病毒研究进展 | 第8-18页 |
·禽流感病毒(AIV)的病原及形态结构 | 第8-9页 |
·禽流感病毒抵抗力 | 第9-10页 |
·禽流感病毒分子生物学特性 | 第10-12页 |
·禽流感病毒的遗传变异 | 第12-13页 |
·禽流感的致病性 | 第13-14页 |
·禽流感的诊断与防制 | 第14-15页 |
·禽流感的危害及公共卫生意义 | 第15-18页 |
2 抗体的研究进展 | 第18-30页 |
·抗体的结构及生物学特性 | 第18页 |
·抗体的发展历程 | 第18-21页 |
·基因工程抗体 | 第21-22页 |
·基因工程抗体的人源化 | 第22-23页 |
·小分子抗体 | 第23-27页 |
·噬菌体展示技术原理及特点 | 第27页 |
·我国基因工程抗体的研究现状 | 第27-28页 |
·趋势及展望 | 第28-30页 |
3 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
第二章 材料和方法 | 第32-54页 |
1 材料 | 第32-37页 |
·细胞株、菌株及载体 | 第32页 |
·主要试剂 | 第32-33页 |
·溶液配制 | 第33-36页 |
·引物 | 第36页 |
·主要仪器 | 第36-37页 |
2 方法 | 第37-54页 |
·杂交瘤细胞总RNA 的提取 | 第37页 |
·逆转录合成cDNA 第一条链 | 第37页 |
·VH 和 VL 基因的扩增 | 第37-38页 |
·VH/VL PCR 产物的回收与纯化 | 第38-39页 |
·VH/VL PCR 产物的克隆和鉴定 | 第39-42页 |
·ScFv 基因的扩增、组装和鉴定 | 第42-44页 |
·ScFv 基因表达载体的构建 | 第44-47页 |
·重组抗体得噬菌体表面展示 | 第47-48页 |
·pCANTA85E-F单链抗体的分泌表达 | 第48-49页 |
·重组抗体pCANTA85E-F的免疫学检测 | 第49-54页 |
第三章 结果 | 第54-61页 |
·杂交瘤细胞总 RNA 的提取电泳 | 第54页 |
·VH、VL 基因片段的扩增和鉴定 | 第54-55页 |
·pMD18-T- VH/VL重组质粒的筛选和鉴定 | 第55-56页 |
·全套ScFv 基因片段的拼接和PCR扩增鉴定 | 第56页 |
·pCANTA85E-ScFv 的克隆 | 第56页 |
·pCANTA85E-ScFv重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第56-57页 |
·pCANTA85E-ScFv抗体库容量鉴定 | 第57-58页 |
·噬菌体文库的淘洗 | 第58-59页 |
·重组抗体可溶性表达产物的SDS-PAGE 和 Western blot分析 | 第59-60页 |
·表达产物的ELISA分析 | 第60页 |
·表达产物的 HI 分析 | 第60-61页 |
第四章 讨论 | 第61-65页 |
·ScFv 分子的组装 | 第61页 |
·linker 的设计 | 第61-62页 |
·载体的构建 | 第62页 |
·重组抗体的表达 | 第62页 |
·影响容量的因素 | 第62-64页 |
·富集和淘选 | 第64页 |
·展望 | 第64-65页 |
第五章 结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-70页 |
附录 | 第70-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
作者简介 | 第74页 |