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利用噬菌体展示技术制备高致病性禽流感病毒(HPAIV)的单链抗体(ScFv)

中文摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 文献综述第8-32页
 1. 禽流感病毒研究进展第8-18页
   ·禽流感病毒(AIV)的病原及形态结构第8-9页
   ·禽流感病毒抵抗力第9-10页
   ·禽流感病毒分子生物学特性第10-12页
   ·禽流感病毒的遗传变异第12-13页
   ·禽流感的致病性第13-14页
   ·禽流感的诊断与防制第14-15页
   ·禽流感的危害及公共卫生意义第15-18页
 2 抗体的研究进展第18-30页
   ·抗体的结构及生物学特性第18页
   ·抗体的发展历程第18-21页
   ·基因工程抗体第21-22页
   ·基因工程抗体的人源化第22-23页
   ·小分子抗体第23-27页
   ·噬菌体展示技术原理及特点第27页
   ·我国基因工程抗体的研究现状第27-28页
   ·趋势及展望第28-30页
 3 本研究的目的和意义第30-32页
第二章 材料和方法第32-54页
 1 材料第32-37页
   ·细胞株、菌株及载体第32页
   ·主要试剂第32-33页
   ·溶液配制第33-36页
   ·引物第36页
   ·主要仪器第36-37页
 2 方法第37-54页
   ·杂交瘤细胞总RNA 的提取第37页
   ·逆转录合成cDNA 第一条链第37页
   ·VH 和 VL 基因的扩增第37-38页
   ·VH/VL PCR 产物的回收与纯化第38-39页
   ·VH/VL PCR 产物的克隆和鉴定第39-42页
   ·ScFv 基因的扩增、组装和鉴定第42-44页
   ·ScFv 基因表达载体的构建第44-47页
   ·重组抗体得噬菌体表面展示第47-48页
   ·pCANTA85E-F单链抗体的分泌表达第48-49页
   ·重组抗体pCANTA85E-F的免疫学检测第49-54页
第三章 结果第54-61页
   ·杂交瘤细胞总 RNA 的提取电泳第54页
   ·VH、VL 基因片段的扩增和鉴定第54-55页
   ·pMD18-T- VH/VL重组质粒的筛选和鉴定第55-56页
   ·全套ScFv 基因片段的拼接和PCR扩增鉴定第56页
   ·pCANTA85E-ScFv 的克隆第56页
   ·pCANTA85E-ScFv重组质粒的PCR和酶切鉴定第56-57页
   ·pCANTA85E-ScFv抗体库容量鉴定第57-58页
   ·噬菌体文库的淘洗第58-59页
   ·重组抗体可溶性表达产物的SDS-PAGE 和 Western blot分析第59-60页
   ·表达产物的ELISA分析第60页
   ·表达产物的 HI 分析第60-61页
第四章 讨论第61-65页
   ·ScFv 分子的组装第61页
   ·linker 的设计第61-62页
   ·载体的构建第62页
   ·重组抗体的表达第62页
   ·影响容量的因素第62-64页
   ·富集和淘选第64页
   ·展望第64-65页
第五章 结论第65-66页
参考文献第66-70页
附录第70-73页
致谢第73-74页
作者简介第74页

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