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比较蛋白质组学揭示苏云金芽胞杆菌YBT-1520不同生长期代谢变化与杀虫晶体蛋白合成的翻译调控间关系

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
缩略语第11-13页
1 前言第13-41页
   ·苏云金芽胞杆菌研究进展第13-21页
     ·苏云金芽胞杆菌简介第13-14页
     ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白大量合成的机制第14-19页
       ·cry基因的转录机制第14-17页
       ·Cry蛋白合成的翻译调控第17-18页
       ·Cry蛋白的翻译后调控第18-19页
     ·营养成分对Cry蛋白合成的影响第19-20页
       ·氮源第19页
       ·碳源第19-20页
       ·矿物质第20页
     ·细胞代谢对Cry蛋白合成的影响第20-21页
     ·小结第21页
   ·蛋白质组学研究进展第21-39页
     ·蛋白质组学的产生和相关概念第21-22页
     ·蛋白质组学发展近况第22-26页
       ·蛋白质组学技术第23页
       ·生物信息学第23-24页
       ·糖蛋白质组学第24页
       ·细胞生物学第24-25页
       ·微生物蛋白质组学第25页
       ·植物蛋白质组学第25页
       ·动物蛋白质组学第25-26页
       ·生物医学蛋白质组学第26页
     ·微生物蛋白质组学研究进展第26-33页
       ·胁迫条件下的微生物蛋白质组学第26-29页
       ·病原微生物蛋白质组学第29-30页
       ·微生物生理的定量蛋白质组学第30-31页
       ·微生物亚蛋白质组学第31页
       ·基因工程微生物蛋白质组学第31页
       ·发酵工程微生物蛋白质组学第31-32页
       ·微生物蛋白质组学与多组学的结合第32页
       ·展望第32-33页
     ·芽胞杆菌蛋白质组研究进展第33-39页
       ·枯草芽胞杆菌全细胞蛋白质组鉴定第33-34页
       ·枯草芽胞杆菌细胞生理研究第34-36页
       ·枯草芽胞杆菌对压力和饥饿的适应性第36-37页
       ·蜡状芽胞杆菌群蛋白质组研究第37-38页
       ·苏云金芽胞杆菌的蛋白质组研究现状第38-39页
       ·小结第39页
   ·课题的立题背景及研究目的第39-41页
     ·立题背景第39-40页
     ·研究目的第40-41页
2 材料和方法第41-60页
   ·实验材料第41-47页
     ·菌株第41页
     ·培养基第41页
     ·主要实验仪器第41-42页
     ·引物第42-43页
     ·相关试剂、缓冲液的配方第43-47页
   ·实验方法第47-60页
     ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520生长曲线的测定第47页
     ·苏云金芽胞杆菌全细胞蛋白质提取第47-48页
     ·蛋白质的定量(Bradford法)第48页
       ·标准法第48页
       ·微量法第48页
     ·蛋白质双向电泳第48-51页
       ·蛋白样品上样量的选择第48页
       ·第一向等点聚焦IEF第48-50页
       ·第二向SDS-PAGE电泳第50-51页
     ·蛋白胶的染色(质谱兼容)第51-52页
       ·Neuhoff胶体考马斯亮蓝G-250染色法第51-52页
       ·可兼容质谱分析的硝酸银染色方法第52页
     ·双向电泳胶图分析流程第52-53页
     ·蛋白质的胶内胰蛋白酶酶解第53页
     ·蛋白质的鉴定第53-54页
     ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520总RNA的提取第54-55页
     ·实时荧光定量PCR(real-time PCR)第55-58页
       ·RNA的定量及质量检测第55-56页
       ·RNA样品中DNA的消化第56页
       ·RNA的反转录PCR第56-57页
       ·实时荧光定量PCR反应第57-58页
     ·能量代谢物质的高效液相法检测第58-60页
       ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520细胞内能量物质的提取第58页
       ·YBT-1520细胞内能量物质的HPLC分离第58-60页
3 结果与分析第60-89页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520在合成培养基中的生长第60-62页
     ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520最适合成培养基的确定第60页
     ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520生长曲线的建立第60-62页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520理论蛋白质图谱分析第62-63页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520双向电泳图谱建立第63-65页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520不同生长期蛋白质组差异分析第65-71页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520生长和碳代谢相关基因表达分析第71-72页
     ·YBT-1520总RNA的提取第71-72页
     ·YBT-1520生长和碳代谢相关基因表达量的荧光定量PCR分析第72页
   ·苏云金芽胞杆菌YBT-1520生长相关蛋白表达变化分析第72-74页
   ·苏云金芽胞杆菌不同生长期代谢变化分析第74-83页
     ·YBT-1520代谢相关蛋白表达变化分析第74-77页
     ·碳水化合物代谢变化分析第77-83页
       ·糖酵解途径第78页
       ·TCA循环第78-79页
       ·脂肪酸代谢和聚2-羟基丁酸(PHB)代谢分析第79-80页
       ·丙酮酸的来源第80页
       ·乙酰辅酶A的去向第80-82页
       ·氨基酸代谢分析第82-83页
     ·小结第83页
   ·蛋白质组学揭示的能量代谢变化第83-84页
   ·不同生长期的能量代谢物质含量的HPLC分析第84-86页
   ·细胞信号转导相关蛋白的表达变化第86-88页
   ·蛋白酶与毒力因子第88-89页
4 讨论第89-96页
   ·杀虫晶体蛋白氨基酸前体来源第89-91页
   ·合成杀虫晶体蛋白能量来源第91-93页
   ·杀虫晶体蛋白翻译调控相关蛋白表达变化第93页
   ·苏云金芽胞杆菌不同生长时期代谢变化与杀虫晶体蛋白合成翻译调控间关系第93-96页
5 总结与展望第96-98页
参考文献第98-112页
攻读博士期间发表和参与发表文献第112-113页
致谢第113-114页
附录第114-119页

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