| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 综述与导言 | 第9-23页 |
| ·CoQ的生物学功能 | 第9-10页 |
| ·CoQ的生物合成 | 第10-14页 |
| ·生物合成CoQ的重要酶——4-羟苯甲酸聚异戊二烯转移酶 | 第14-16页 |
| ·DNA改组技术(DNA shuffling) | 第16-20页 |
| ·大肠杆菌的同源重组 | 第20-21页 |
| ·应用温敏质粒的基因敲除方案原理 | 第21-22页 |
| ·课题研究背景及工作目标 | 第22-23页 |
| ·研究背景 | 第22页 |
| ·工作目标 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·材料与仪器 | 第23-26页 |
| ·化学药品与生物试剂 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第24页 |
| ·缓冲液 | 第24-25页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·载体质粒 | 第25页 |
| ·重组质粒 | 第25页 |
| ·实验仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·微生物学方法 | 第26-27页 |
| ·微生物的培养 | 第26-27页 |
| ·菌种的保藏 | 第27页 |
| ·遗传学方法 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·分子生物学方法 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的抽提 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌中染色体DNA的抽提 | 第29-30页 |
| ·DNA的酶切 | 第30页 |
| ·DNA的连接 | 第30页 |
| ·DNA的沉淀 | 第30页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶回收(试剂盒方法) | 第31页 |
| ·大肠杆菌CoQ的提取与鉴定方法 | 第31-32页 |
| ·醇碱皂化法提取CoQ | 第31-32页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)检测分析CoQ | 第32页 |
| ·实验过程中使用的计算机软件 | 第32-33页 |
| 第3章 结果与分析 | 第33-55页 |
| ·ubiA表达质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·ubiA Domain I外侧序列的克隆 | 第34-37页 |
| ·缺失Domain I的ubiA表达质粒pTrc-ubiA △ D1的构建 | 第37页 |
| ·双链随机合成DNA的制备 | 第37-39页 |
| ·线性化pTrc-ubiA △ D1片段的制备 | 第39-42页 |
| ·pT rc-ubiA △ D1的酶消化 | 第39-40页 |
| ·线性pTrc-ubiA △ D1片段纯化回收方法的确定 | 第40-42页 |
| ·线性pTrc-ubiA A D1与随机序列片段连接方案的优化 | 第42-45页 |
| ·线性pTrc-ubiA △ D1与随机序列片段之间连接比例的确定 | 第42-43页 |
| ·线性pTrc-ubiA △ D1与随机序列片段连接温度与时间的确定 | 第43-44页 |
| ·感受态细胞最佳转化时间的摸索 | 第44-45页 |
| ·ubiA基因D1突变文库的获得及筛选 | 第45-55页 |
| ·ubiA基因D1改组产物的克隆 | 第45-46页 |
| ·皂化法提取CoQ回流时间的优化 | 第46-48页 |
| ·ubiA局部突变重组菌CoQ合成能力的检测和分析 | 第48-50页 |
| ·局部改组ubiA基因回补能力的鉴定 | 第50-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-62页 |
| ·PCR鉴定pMAK-ubiA/MDA12及其各衍生菌株基因组时的模板交错现象 | 第55-58页 |
| ·ubiA基因局部改组的结果评估 | 第58-60页 |
| ·课题前景展望 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
