| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩写词表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 1. 研究背景 | 第14-23页 |
| ·非洲菊(GERBERA HYBRIDA)及其遗传转化体系的研究现状 | 第14-17页 |
| ·非洲菊及再生体系研究概况 | 第14-16页 |
| ·非洲菊遗传转化的研究现状 | 第16-17页 |
| ·RNA干涉及其在植物上的运用 | 第17-21页 |
| ·RNA干涉发现及其原理 | 第17-19页 |
| ·RNA干涉在植物上的运用 | 第19-21页 |
| ·PRGL基因 | 第21-22页 |
| ·本论文的研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·载体与菌株 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·细菌培养基 | 第24页 |
| ·植物培养基 | 第24-25页 |
| ·细菌的培养 | 第25页 |
| ·大肠杆菌质粒提取及纯化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第25页 |
| ·质粒DNA的进一步纯化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒DNA的转化 | 第26页 |
| ·感受态的制备 | 第26页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第26页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·总RNA的浓度及纯度测定 | 第27-28页 |
| ·反转录PCR | 第28-29页 |
| ·DNA的限制性酶切 | 第29页 |
| ·目的片段的回收 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的连接 | 第30页 |
| ·载体构建流程图 | 第30-32页 |
| ·RNA干涉载体(如图2.3所示) | 第30页 |
| ·PRGL超表达载体(如图2.4所示) | 第30-32页 |
| ·工程菌种的制备 | 第32-34页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·植物材料的培养 | 第34页 |
| ·农杆菌的培养及工程菌液的制备 | 第34-35页 |
| ·外植体转化方法 | 第35页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化体系的优化 | 第35-37页 |
| ·抑菌抗生素对根癌农杆菌生长的影响 | 第35页 |
| ·抑菌抗生素对非洲菊不定芽诱导的影响 | 第35页 |
| ·选择抗生素对非洲菊不定芽诱导的影响 | 第35-36页 |
| ·选择抗生素对非洲菊不定根诱导的影响 | 第36页 |
| ·选择抗生素梯度筛选对转化的影响 | 第36页 |
| ·非洲菊不同基因型对转化的影响 | 第36页 |
| ·半胱氨酸(L-cys)对转化的影响 | 第36页 |
| ·共培养过程中使用滤纸对转化的影响 | 第36页 |
| ·延迟筛选对转化效率的影响 | 第36-37页 |
| ·植物 DNA的提取 | 第37页 |
| ·拟转化植株的PCR检测 | 第37-39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-50页 |
| ·PRGL基因超表达植物表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·目的片段克隆到pMD 18 Simple-T载体 | 第39页 |
| ·目的片段的测序 | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建及PCR、酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·PRGL基因RNA干涉植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·反义片段及正义片段的PCR扩增 | 第41页 |
| ·反义及正义片段克隆到pMD 18 Simple-T载体 | 第41页 |
| ·中间表达载体(pRNAi.1)的构建及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达载体的构建及酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404转化子的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·非洲菊转化体系的优化 | 第44-48页 |
| ·抑菌抗生素(头孢霉素)对根癌农杆菌生长的影响 | 第44-45页 |
| ·抑菌抗生素(头孢霉素)对非洲菊不定芽诱导的影响 | 第45页 |
| ·潮霉素对非洲菊不定芽诱导的影响 | 第45-46页 |
| ·潮霉素对非洲菊不定根诱导的影响 | 第46页 |
| ·选择抗生素梯度筛选对抗性芽诱导的影响 | 第46-47页 |
| ·非洲菊不同基因型对抗性芽诱导的影响 | 第47-48页 |
| ·L-cys的添加对转化的影响 | 第48页 |
| ·共培养过程中使用滤纸对转化的影响 | 第48页 |
| ·延迟筛选对抗性芽诱导的影响 | 第48页 |
| ·拟转化植株的PCR检测 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| ·植物表达载体构建中的几点体会 | 第50-51页 |
| ·转化体系的优化 | 第51-55页 |
| ·不同基因型植株抗性芽诱导率具有差异 | 第51页 |
| ·L-cys对非洲菊抗性芽的诱导不起作用 | 第51-52页 |
| ·共培养中使用滤纸对抗性芽诱导率无明显改善 | 第52页 |
| ·梯度筛选无法保证非洲菊转基因苗的获得 | 第52-53页 |
| ·延迟筛选有利于抗性芽的获得 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 图版 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
