| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·意义重大的生物材料 | 第10-12页 |
| ·聚γ谷氨酸的研究现状 | 第12-18页 |
| ·聚γ谷氨酸的物理和化学特性 | 第12页 |
| ·聚γ谷氨酸的应用 | 第12-14页 |
| ·利用微生物合成聚γ谷氨酸 | 第14-16页 |
| ·影响产量的因素 | 第14-15页 |
| ·分子量的影响因素 | 第15-16页 |
| ·D/L谷氨酸比例的影响因素 | 第16页 |
| ·与聚γ谷氨酸的合成相关的基因和酶 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌的分子生物学 | 第18-20页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 利用枯草芽胞杆菌合成聚γ谷氨酸 | 第22-34页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-27页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·化学试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·聚γ谷氨酸产生菌的筛选 | 第23页 |
| ·聚γ谷氨酸产生菌的鉴定方法 | 第23-26页 |
| ·菌种保藏 | 第26页 |
| ·枯草芽胞杆菌的摇瓶发酵 | 第26页 |
| ·聚γ谷氨酸浓度的测定 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·聚γ谷氨酸产生菌的筛选 | 第27页 |
| ·聚γ谷氨酸产生菌的鉴定 | 第27-28页 |
| ·培养基成分对产量的影响 | 第28-31页 |
| ·单一碳源对产量和生物量的影响 | 第28页 |
| ·甘油和葡萄糖的混合碳源对产量的影响 | 第28-29页 |
| ·柠檬酸浓度对产量的影响 | 第29页 |
| ·氮源对生物量和产量的影响 | 第29-30页 |
| ·外源谷氨酸对生物量和产量的影响 | 第30页 |
| ·Mn~(2+)的浓度对生物量和产量的影响 | 第30-31页 |
| ·Na~+的浓度对生物量和产量的影响 | 第31页 |
| ·培养条件对产量的影响 | 第31-33页 |
| ·装液量对生物量和产量的影响 | 第31页 |
| ·接种量对生物量和产量的影响 | 第31-32页 |
| ·初始pH值对生物量和产量的影响 | 第32页 |
| ·培养温度对生物量和产量的影响 | 第32-33页 |
| ·最优条件下摇瓶发酵的结果 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 聚γ谷氨酸合成酶基因(pgs1,2,3)的克隆及表达 | 第34-45页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-37页 |
| ·菌株 | 第34-35页 |
| ·质粒 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·酶与试剂 | 第35-36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·大肠杆菌质粒提取方法 | 第36页 |
| ·电转化E.coli感受态的制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌，枯草芽胞杆菌染色体的提取 | 第36页 |
| ·以大肠杆菌为宿主的诱导表达 | 第36页 |
| ·以大肠杆菌为宿主的质粒的转化(CaCl_2法) | 第36页 |
| ·连接产物电转化E.coli | 第36页 |
| ·大肠杆菌的摇瓶发酵 | 第36页 |
| ·PCR扩增程序 | 第36-37页 |
| ·引物序列 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-45页 |
| ·Bacillus subtilis chungkookjang pgs基因的克隆及其序列 | 第38页 |
| ·含trc启动子的pgs基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·含CO组成型启动子的聚γ谷氨酸合成酶基因的表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·含gnt组成型启动子的pgs基因的表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·启动子对大肠杆菌的聚γ谷氨酸合成的影响 | 第42-43页 |
| ·含质粒pMpgs123的大肠杆菌的摇瓶发酵实验 | 第42-43页 |
| ·含质粒pCOpgs及pGntpgs的大肠杆菌的摇瓶发酵实验 | 第43页 |
| ·不同的大肠杆菌菌株对聚γ谷氨酸合成的影响 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第四章 基因工程大肠杆菌合成聚γ谷氨酸的发酵工艺 | 第45-49页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-46页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·5-L发酵罐的发酵条件 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·BL21(DE3)-pMpgs123的pH值恒化补料发酵 | 第46-47页 |
| ·BL21(DE3)-pCOpgs的pH值恒化补料发酵 | 第47页 |
| ·BL21(DE3)-pGntpgs的pH值恒化补料发酵 | 第47页 |
| ·BL21(DE3)-pCopgs的对数补料发酵 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第五章 大肠杆菌合成聚γ谷氨酸的微阵列分析 | 第49-61页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-50页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·酶及化学试剂 | 第49-50页 |
| ·仪器设备 | 第50页 |
| ·操作流程 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第六章 大肠杆菌合成聚γ谷氨酸的代谢流分析 | 第61-76页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-66页 |
| ·质粒与菌株 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·分析方法 | 第61页 |
| ·代谢产物的分析 | 第61-62页 |
| ·数据处理方法 | 第62-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-75页 |
| ·补料培养中E.coli BL21(DE3)-PCOpgs代谢网络的构建 | 第66-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第七章 结论与展望 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| ·展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
