| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1．1 果树遗传转化研究概况 | 第11-15页 |
| 1．1．1 果树遗传转化受体系统 | 第12-13页 |
| 1．1．2 果树遗传转化方法 | 第13-14页 |
| 1．1．3 基因工程技术在果树改良方面的应用 | 第14-15页 |
| 1．2 ABA与果实成熟的调控 | 第15-17页 |
| 1．2．1 ABA合成途径 | 第15-16页 |
| 1．2．2 ABA在果实成熟过程中的作用 | 第16-17页 |
| 1．3 betA基因和als突变基因 | 第17-18页 |
| 1．4 本工作的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 ZEP和NCED基因植物表达载体的构建和转基因烟草的产生 | 第19-36页 |
| 2．1 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2．1．1 植物材料 | 第19页 |
| 2．1．2 菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 2．1．3 培养基、试剂和溶液 | 第20页 |
| 2．1．4 ZEP和NCED全长片段的扩增 | 第20-21页 |
| 2．1．5 DNA片段回收 | 第21-22页 |
| 2．1．6 PCR扩增片段与T-Easy Vector的连接 | 第22页 |
| 2．1．7 将ZEP和NCED基因重组到植物表达载体 | 第22-23页 |
| 2．1．7．1 质粒DNA的提取和酶切 | 第22页 |
| 2．1．7．2 磷酸化接头的连接和酶切 | 第22页 |
| 2．1．7．3 DNA片段的去磷酸化反应 | 第22-23页 |
| 2．1．7．4 目的DNA片段与载体DNA的连接 | 第23页 |
| 2．1．7．5 连接产物的转化和重组子的筛选 | 第23页 |
| 2．1．8 转基因烟草的获得 | 第23-27页 |
| 2．1．8．1 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第23-24页 |
| 2．1．8．2 根癌农杆菌转化烟草 | 第24页 |
| 2．1．8．3 转基因烟草的PCR和Southern杂交检测 | 第24-27页 |
| 2．2 结果与分析 | 第27-34页 |
| 2．2．1 ZEP和NCED基因全长片段的扩增 | 第27页 |
| 2．2．1．1 ZEP基因全长片段的扩增 | 第27页 |
| 2．2．1．2 NCED基因全长片段的扩增 | 第27页 |
| 2．2．2 构建分别插入ZEP基因和NCED基因的植物表达载体 | 第27-31页 |
| 2．2．2．1 ZEP基因植物表达载体的构建和重组质粒的鉴定 | 第27-29页 |
| 2．2．2．2 NCED基因植物表达载体的构建和重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| 2．2．3 转基因烟草分子生物学检测 | 第31-34页 |
| 2．2．3．1 转ZEP、als基因烟草的PCR和Southern杂交检测 | 第31-33页 |
| 2．2．3．2 转NCED、als基因烟草的PCR检测 | 第33-34页 |
| 2．2．4 转基因烟草的形态和生长发育 | 第34页 |
| 2．3 讨论 | 第34-36页 |
| 3 农杆菌介导的沾化冬枣茎尖转化 | 第36-51页 |
| 3．1 材料与方法 | 第36-42页 |
| 3．1．1 植物材料 | 第36页 |
| 3．1．2 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 3．1．3 培养基 | 第37页 |
| 3．1．4 药品、试剂和溶液 | 第37-38页 |
| 3．1．5 遗传转化 | 第38-41页 |
| 3．1．5．1 农杆菌培养 | 第38页 |
| 3．1．5．2 基本转化步骤 | 第38-39页 |
| 3．1．5．3 转化植株的PCR检测 | 第39-41页 |
| 3．1．5．4 转化植株的PCR-Southern杂交检测 | 第41页 |
| 3．1．6 数据处理和分析 | 第41-42页 |
| 3．1．7 转gus基因植株的组织化学染色 | 第42页 |
| 3．2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 3．2．1 转化茎尖的筛选 | 第42-43页 |
| 3．2．2 转化植株的生根和移栽 | 第43页 |
| 3．2．3 转基因植株的分子生物学检测 | 第43-44页 |
| 3．2．4 影响冬枣茎尖遗传转化效率的因素 | 第44-47页 |
| 3．2．4．1 农杆菌悬浮液浓度 | 第44-45页 |
| 3．2．4．2 浸染时间 | 第45-46页 |
| 3．2．4．3 共培养时间 | 第46页 |
| 3．2．4．4 真空渗入 | 第46-47页 |
| 3．2．5 转gus基因冬枣植株的检测 | 第47-48页 |
| 3．2．5．1 Gus组织化学染色 | 第47页 |
| 3．2．5．2 转gus基因植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3．3 讨论 | 第48-51页 |
| 3．3．1 不同因素对沾化冬枣茎尖转化效率的影响 | 第48-50页 |
| 3．3．2 关于冬枣茎尖遗传转化中嵌合体的讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
