| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·芽孢杆菌的简要介绍 | 第8页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达体系的概述 | 第8-10页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的优缺点--相对于大肠杆菌 | 第10-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的优点 | 第10-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的不足之处 | 第11页 |
| ·枯草芽孢杆菌整合载体的研究现状 | 第11-14页 |
| ·整合载体与染色体同源重组的分子机理 | 第11页 |
| ·整合载体的类型 | 第11-12页 |
| ·非常规同源整合 | 第12页 |
| ·同源重组的方式 | 第12-14页 |
| ·整合载体的整合位点 | 第14页 |
| ·应用于枯草芽孢杆菌的启动子 | 第14-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌的麦芽糖代谢及其启动子 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌的spoOA基因的功能 | 第17页 |
| ·本课题实践意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·生化试剂 | 第19-20页 |
| ·仪器设备 | 第20页 |
| ·PCR实验所用引物及扩增条件 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-26页 |
| ·大肠杆菌和枯草杆菌质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·枯草杆菌染色体DNA的提取 | 第23页 |
| ·DNA片段的回收 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·冻存大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞DNA转化 | 第23-24页 |
| ·枯草杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·β-半乳糖甙酶酶活检测(Zeigler，2002) | 第24-25页 |
| ·枯草杆菌生孢子率的检测 | 第25页 |
| ·枯草杆菌孢子染色镜检 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-39页 |
| ·spoOA位点双交叉整合载体Pyzq-1的构建 | 第26-28页 |
| ·枯草杆菌LacA位点启动子检测整合载体Pyzq-2的构建 | 第28-29页 |
| ·枯草杆菌麦芽糖操纵子cre~-启动子PΔglvA的克隆及相应表达载体Pyzq-3的构建 | 第29-31页 |
| ·质粒Pyzq-3在枯草杆菌lacA位点整合及相应突变株的构建 | 第31-32页 |
| ·不同浓度的麦芽糖诱导对PΔglvA活性的影响 | 第32-33页 |
| ·Pyzq-3转化B.subtilis GJYY-03及相应的spoOA~-突变株的构建和鉴定 | 第33-36页 |
| ·宿主菌的不同遗传背景(spoOA~-)及培养基中的葡萄糖对启动子PΔglvA活性的影响 | 第36-39页 |
| 4 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 5 参考文献 | 第41-46页 |
| 6 发表的论文 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
