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小麦抗白粉病基因同源序列的分离鉴定及分子标记的研究

第一部分 文献综述第1-44页
 第一章 植物抗病基因研究进展第10-30页
  1 植物抗病的分子机制第10-12页
  2 已克隆的植物抗病基因的类型、结构特点及其作用机制第12-16页
   2.1 NBS-LRR类第14页
   2.2 细胞外LRR类(LRR-TM)第14-15页
   2.3 蛋白激酶类(PK)第15页
   2.4 跨膜受体激酶类(LRR-TM-PK)第15页
   2.5 其它第15-16页
  3 植物抗病基因克隆的方法及策略第16-28页
   3.1 图位克隆法第16-23页
    3.1.1 图位克隆法的原理第16-17页
    3.1.2 图位克隆法的基本技术环节第17-22页
    3.1.3 应用图位克隆技术成功克隆的植物抗病基因第22-23页
    3.1.4 图位克隆技术的局限性第23页
   3.2 转座子标签法第23-24页
    3.2.1 转座子标签法原理第23页
    3.2.2 用转座子标签法成功克隆植物基因必须具备的条件第23页
    3.2.3 应用转座子标签法成功克隆的植物抗病基因第23页
    3.2.4 转座子标签克隆法的局限性第23-24页
   3.3 基于同源序列的候选基因法第24-27页
    3.3.1 基于同源序列的候选基因法的原理第24页
    3.3.2 基于同源序列的候选基因法的关键技术环节第24-25页
    3.3.3 基于同源序列的候选基因法在分离植物基因中的应用第25-26页
    3.3.4 基于同源序列的候选基因法的优越性第26页
    3.3.5 基于同源序列的候选基因法存在的局限性第26-27页
    3.3.6 基于同源序列的候选基因法研究展望第27页
   3.4 差异显示技术克隆抗病基因第27-28页
   3.5 通过病原菌的表达产物与抗病基因产物的特异结合来克隆抗病基因第28页
   3.6 鸟枪克隆法第28页
  4 植物防卫基因克隆的研究第28-30页
 第二章 小麦抗白粉病基因及相关基因研究进展第30-44页
  1 小麦白粉病抗性基因(Powdery mildew resistance gene,Pm)来源及染色体定位第30-32页
   1.1 Pm基因的来源第30-32页
   1.2 Pm基因染色体定位第32页
  2 Pm基因的分子标记和作图第32-40页
   2.1 主效基因的分子标记与作图第33-39页
   2.2 数量抗性位点的分子定位第39-40页
  3 小麦抗白粉病防卫基因的研究第40-42页
  4 小麦抗白粉病基因及相关基因克隆的策略及研究现状第42-44页
第二部分 研究报告第44-96页
 引言第44-45页
 第一章 小麦中抗病基因同源序列的分离与鉴定第45-83页
  1 材料和方法第45-57页
   1.1 材料第45页
   1.2 方法第45-57页
    1.2.1 DNA提取第45-46页
    1.2.2 总RNA提取第46-47页
    1.2.3 cDNA第一链的合成第47页
    1.2.4 基因组PCR及RT-PCR所用引物第47-49页
    1.2.5 基因组PCR及RT-PCR反应体系第49-50页
    1.2.6 基因组PCR及RT-PCR反应程序第50页
    1.2.7 聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收第50页
    1.2.8 PCR产物的纯化第50页
    1.2.9 PCR产物的连接第50-51页
    1.2.10 PCR连接产物的转化第51-52页
    1.2.11 菌液PCR检测第52页
    1.2.12 测序用少量质粒的提取第52-53页
    1.2.13 测序PCR反应体系及反应程序第53-54页
    1.2.14 测序PCR产物纯化第54页
    1.2.15 测序胶的制备第54页
    1.2.16 电泳第54页
    1.2.17 DNAstar分析软件的使用方法第54-55页
    1.2.18 等位特异扩增多态性位点第55-56页
    1.2.19 表达分析第56-57页
  2 结果与分析第57-75页
   2.1 小麦基因组中Mlo类基因序列的分离及鉴定第57-60页
    2.1.1 小麦基因组Mlo类DNA及cDNA序列的克隆及序列分析第57-59页
    2.1.2 小麦基因组中Mlo类序列初步定位分析第59-60页
   2.2 小麦基因组中Mla类基因序列的克隆、初步定位分析及Rarl类基因的扩增第60-62页
    2.2.1 Mla类基因序列的克隆及初步定位分析第60-61页
    2.2.2 Rarl类基因的扩增第61-62页
   2.3 小麦基因组中NBS-LRR类基因序列的分离及鉴定第62-69页
    2.3.1 小麦中NBS-LRR类基因序列的克隆及序列比较分析第62-65页
    2.3.2 利用等位特异扩增多态性位点的方法鉴定克隆的序列第65-67页
    2.3.3 克隆片段的表达分析第67-68页
    2.3.4 克隆片段在小麦基因组中的定位第68-69页
   2.4 小麦基因组中NBS类基因序列的分离及鉴定第69-71页
    2.4.1 小麦基因组中NBS类基因序列的分离第69-70页
    2.4.2 小麦基因组中NBS类基因序列初步染色体定位分析第70-71页
   2.5 用根据拟南芥抗白粉病基因设计的引物扩增小麦基因组第71-72页
    2.5.1 用拟南芥RPW8基因的RT-PCR引物扩增小麦基因组第71-72页
    2.5.2 根据拟南芥RPS2基因保守区域设计的特异引物进行RT-PCR扩增结果第72页
   2.6 用根据烟草抗花叶病毒基因设计的引物扩增小麦基因组第72-75页
  3 讨论第75-83页
   3.1 小麦基因组中存在Mlo类及Mla类基因序列第75-76页
   3.2 小麦基因组中存在的一类NBS-LRR基因第76-78页
   3.3 本研究对基于同源序列的候选基因法在抗病基因克隆方面的发展第78页
   3.4 本研究对基于同源序列的候选基因法的技术改进第78-82页
   3.5 对本研究中发现的有关问题的探讨第82-83页
    3.5.1 应用简并引物对小麦基因组进行扩增时应注意的几个方面第82页
    3.5.2 同一基因在同种植物及不同种植物植物中的保守性问题第82-83页
 第二章 小麦抗白粉病基因分子标记的筛选第83-96页
  1 材料和方法第83-86页
   1.1 材料第83页
   1.2 方法第83-86页
    1.2.1 白粉病抗性鉴定第83-84页
    1.2.2 基因组DNA提取与检测第84页
    1.2.3 BSA (Bulked Segregant Analysis)分池第84页
    1.2.4 微卫星DNA扩增第84-85页
    1.2.5 扩增产物的电泳第85页
    1.2.6 扩增产物的银染显色第85页
    1.2.7 连锁分析第85-86页
  2 结果与分析第86-93页
   2.1 (Mardler/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果第86页
   2.2 (VPM/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果第86-87页
    2.2.1 (VPM/7~*Bainong3217)NIL F_2分离群体白粉病抗性离体鉴定第86页
    2.2.2 (VPM/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果第86-87页
   2.3 (R43/5~*Bainong3217)NIL SSRJ物筛选结果第87-92页
   2.4 复壮30NIL SSR引物筛选结果第92-93页
    2.4.1 对4D染色体上的SSR引物的筛选第93页
    2.4.2 对6A染色体上的SSR引物的筛选第93页
  3 讨论第93-96页
   3.1 关于复壮30含有的抗白粉病基因的定位问题第93-94页
   3.2 关于小麦Pm21基因SSR标记筛选的有效性问题第94-95页
   3.3 关于小麦Pm2、Pm4b、Pm21和复壮30所含抗白粉病基因下一步分子标记筛选工作的设想第95-96页
全文结论第96-98页
参考文献第98-113页
附录第113-121页
英文摘要第121-123页
致谢第123页

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