第一部分 文献综述 | 第1-44页 |
第一章 植物抗病基因研究进展 | 第10-30页 |
1 植物抗病的分子机制 | 第10-12页 |
2 已克隆的植物抗病基因的类型、结构特点及其作用机制 | 第12-16页 |
2.1 NBS-LRR类 | 第14页 |
2.2 细胞外LRR类(LRR-TM) | 第14-15页 |
2.3 蛋白激酶类(PK) | 第15页 |
2.4 跨膜受体激酶类(LRR-TM-PK) | 第15页 |
2.5 其它 | 第15-16页 |
3 植物抗病基因克隆的方法及策略 | 第16-28页 |
3.1 图位克隆法 | 第16-23页 |
3.1.1 图位克隆法的原理 | 第16-17页 |
3.1.2 图位克隆法的基本技术环节 | 第17-22页 |
3.1.3 应用图位克隆技术成功克隆的植物抗病基因 | 第22-23页 |
3.1.4 图位克隆技术的局限性 | 第23页 |
3.2 转座子标签法 | 第23-24页 |
3.2.1 转座子标签法原理 | 第23页 |
3.2.2 用转座子标签法成功克隆植物基因必须具备的条件 | 第23页 |
3.2.3 应用转座子标签法成功克隆的植物抗病基因 | 第23页 |
3.2.4 转座子标签克隆法的局限性 | 第23-24页 |
3.3 基于同源序列的候选基因法 | 第24-27页 |
3.3.1 基于同源序列的候选基因法的原理 | 第24页 |
3.3.2 基于同源序列的候选基因法的关键技术环节 | 第24-25页 |
3.3.3 基于同源序列的候选基因法在分离植物基因中的应用 | 第25-26页 |
3.3.4 基于同源序列的候选基因法的优越性 | 第26页 |
3.3.5 基于同源序列的候选基因法存在的局限性 | 第26-27页 |
3.3.6 基于同源序列的候选基因法研究展望 | 第27页 |
3.4 差异显示技术克隆抗病基因 | 第27-28页 |
3.5 通过病原菌的表达产物与抗病基因产物的特异结合来克隆抗病基因 | 第28页 |
3.6 鸟枪克隆法 | 第28页 |
4 植物防卫基因克隆的研究 | 第28-30页 |
第二章 小麦抗白粉病基因及相关基因研究进展 | 第30-44页 |
1 小麦白粉病抗性基因(Powdery mildew resistance gene,Pm)来源及染色体定位 | 第30-32页 |
1.1 Pm基因的来源 | 第30-32页 |
1.2 Pm基因染色体定位 | 第32页 |
2 Pm基因的分子标记和作图 | 第32-40页 |
2.1 主效基因的分子标记与作图 | 第33-39页 |
2.2 数量抗性位点的分子定位 | 第39-40页 |
3 小麦抗白粉病防卫基因的研究 | 第40-42页 |
4 小麦抗白粉病基因及相关基因克隆的策略及研究现状 | 第42-44页 |
第二部分 研究报告 | 第44-96页 |
引言 | 第44-45页 |
第一章 小麦中抗病基因同源序列的分离与鉴定 | 第45-83页 |
1 材料和方法 | 第45-57页 |
1.1 材料 | 第45页 |
1.2 方法 | 第45-57页 |
1.2.1 DNA提取 | 第45-46页 |
1.2.2 总RNA提取 | 第46-47页 |
1.2.3 cDNA第一链的合成 | 第47页 |
1.2.4 基因组PCR及RT-PCR所用引物 | 第47-49页 |
1.2.5 基因组PCR及RT-PCR反应体系 | 第49-50页 |
1.2.6 基因组PCR及RT-PCR反应程序 | 第50页 |
1.2.7 聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收 | 第50页 |
1.2.8 PCR产物的纯化 | 第50页 |
1.2.9 PCR产物的连接 | 第50-51页 |
1.2.10 PCR连接产物的转化 | 第51-52页 |
1.2.11 菌液PCR检测 | 第52页 |
1.2.12 测序用少量质粒的提取 | 第52-53页 |
1.2.13 测序PCR反应体系及反应程序 | 第53-54页 |
1.2.14 测序PCR产物纯化 | 第54页 |
1.2.15 测序胶的制备 | 第54页 |
1.2.16 电泳 | 第54页 |
1.2.17 DNAstar分析软件的使用方法 | 第54-55页 |
1.2.18 等位特异扩增多态性位点 | 第55-56页 |
1.2.19 表达分析 | 第56-57页 |
2 结果与分析 | 第57-75页 |
2.1 小麦基因组中Mlo类基因序列的分离及鉴定 | 第57-60页 |
2.1.1 小麦基因组Mlo类DNA及cDNA序列的克隆及序列分析 | 第57-59页 |
2.1.2 小麦基因组中Mlo类序列初步定位分析 | 第59-60页 |
2.2 小麦基因组中Mla类基因序列的克隆、初步定位分析及Rarl类基因的扩增 | 第60-62页 |
2.2.1 Mla类基因序列的克隆及初步定位分析 | 第60-61页 |
2.2.2 Rarl类基因的扩增 | 第61-62页 |
2.3 小麦基因组中NBS-LRR类基因序列的分离及鉴定 | 第62-69页 |
2.3.1 小麦中NBS-LRR类基因序列的克隆及序列比较分析 | 第62-65页 |
2.3.2 利用等位特异扩增多态性位点的方法鉴定克隆的序列 | 第65-67页 |
2.3.3 克隆片段的表达分析 | 第67-68页 |
2.3.4 克隆片段在小麦基因组中的定位 | 第68-69页 |
2.4 小麦基因组中NBS类基因序列的分离及鉴定 | 第69-71页 |
2.4.1 小麦基因组中NBS类基因序列的分离 | 第69-70页 |
2.4.2 小麦基因组中NBS类基因序列初步染色体定位分析 | 第70-71页 |
2.5 用根据拟南芥抗白粉病基因设计的引物扩增小麦基因组 | 第71-72页 |
2.5.1 用拟南芥RPW8基因的RT-PCR引物扩增小麦基因组 | 第71-72页 |
2.5.2 根据拟南芥RPS2基因保守区域设计的特异引物进行RT-PCR扩增结果 | 第72页 |
2.6 用根据烟草抗花叶病毒基因设计的引物扩增小麦基因组 | 第72-75页 |
3 讨论 | 第75-83页 |
3.1 小麦基因组中存在Mlo类及Mla类基因序列 | 第75-76页 |
3.2 小麦基因组中存在的一类NBS-LRR基因 | 第76-78页 |
3.3 本研究对基于同源序列的候选基因法在抗病基因克隆方面的发展 | 第78页 |
3.4 本研究对基于同源序列的候选基因法的技术改进 | 第78-82页 |
3.5 对本研究中发现的有关问题的探讨 | 第82-83页 |
3.5.1 应用简并引物对小麦基因组进行扩增时应注意的几个方面 | 第82页 |
3.5.2 同一基因在同种植物及不同种植物植物中的保守性问题 | 第82-83页 |
第二章 小麦抗白粉病基因分子标记的筛选 | 第83-96页 |
1 材料和方法 | 第83-86页 |
1.1 材料 | 第83页 |
1.2 方法 | 第83-86页 |
1.2.1 白粉病抗性鉴定 | 第83-84页 |
1.2.2 基因组DNA提取与检测 | 第84页 |
1.2.3 BSA (Bulked Segregant Analysis)分池 | 第84页 |
1.2.4 微卫星DNA扩增 | 第84-85页 |
1.2.5 扩增产物的电泳 | 第85页 |
1.2.6 扩增产物的银染显色 | 第85页 |
1.2.7 连锁分析 | 第85-86页 |
2 结果与分析 | 第86-93页 |
2.1 (Mardler/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果 | 第86页 |
2.2 (VPM/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果 | 第86-87页 |
2.2.1 (VPM/7~*Bainong3217)NIL F_2分离群体白粉病抗性离体鉴定 | 第86页 |
2.2.2 (VPM/7~*Bainong3217)NIL SSR引物筛选结果 | 第86-87页 |
2.3 (R43/5~*Bainong3217)NIL SSRJ物筛选结果 | 第87-92页 |
2.4 复壮30NIL SSR引物筛选结果 | 第92-93页 |
2.4.1 对4D染色体上的SSR引物的筛选 | 第93页 |
2.4.2 对6A染色体上的SSR引物的筛选 | 第93页 |
3 讨论 | 第93-96页 |
3.1 关于复壮30含有的抗白粉病基因的定位问题 | 第93-94页 |
3.2 关于小麦Pm21基因SSR标记筛选的有效性问题 | 第94-95页 |
3.3 关于小麦Pm2、Pm4b、Pm21和复壮30所含抗白粉病基因下一步分子标记筛选工作的设想 | 第95-96页 |
全文结论 | 第96-98页 |
参考文献 | 第98-113页 |
附录 | 第113-121页 |
英文摘要 | 第121-123页 |
致谢 | 第123页 |