| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-25页 |
| ·高等植物雄性不育 | 第10-19页 |
| ·雄性不育的分类 | 第10-11页 |
| ·玉米雄性不育的研究进展 | 第11页 |
| ·细胞核雄性不育（Genic Male Sterility GMS） | 第11页 |
| ·细胞质雄性不育（Cytoplasmic Male Sterility,CMS） | 第11页 |
| ·核-质互作型雄性不育（Genic-cytoplasmic Male Sterility） | 第11页 |
| ·玉米细胞质雄性不育 | 第11-15页 |
| ·玉米细胞质雄性不育的分类方法 | 第11-12页 |
| ·不同细胞质雄性不育系的特点 | 第12-13页 |
| ·玉米细胞质雄性不育恢复机理研究进展 | 第13-14页 |
| ·玉米细胞质雄性不育的相关基因及其功能 | 第14-15页 |
| ·细胞质雄性不育和育性恢复的机理 | 第15-19页 |
| ·植物CMS 基因引起雄性不育的原因 | 第15-17页 |
| ·育性相关核基因的克隆及雄性不育性恢复机理的假说 | 第17-19页 |
| ·AFLP 的标记 | 第19-21页 |
| ·AFLP 标记的基本原理 | 第19页 |
| ·AFLP 试验过程包括三个步骤 | 第19-20页 |
| ·改良的AFLP 技术 | 第20页 |
| ·AFLP 技术特点 | 第20页 |
| ·AFLP 标记在遗传学方面的应用 | 第20-21页 |
| ·遗传多态性研究方面 | 第20-21页 |
| ·在个体分型、遗传分析方面 | 第21页 |
| ·在育种应用方面 | 第21页 |
| ·基因克隆 | 第21-25页 |
| ·转座子标签法 | 第21-23页 |
| ·转座子的概念 | 第21-22页 |
| ·转座子的分类 | 第22页 |
| ·玉米中的转座子及其特点 | 第22-23页 |
| ·利用转座子标签克隆的基因 | 第23页 |
| ·RACE 方法 | 第23-24页 |
| ·RACE 技术的原理 | 第23-24页 |
| ·RACE 在植物基因克隆上的应用现状 | 第24页 |
| ·RACE 方法在植物基因克隆上的技术优势 | 第24页 |
| ·“电子”cDNA 文库筛选--一种新的克隆cDNA 全长的技术 | 第24页 |
| ·图位克隆法（mapbased cloning） | 第24页 |
| ·计算机杂交(computer hybridization) | 第24-25页 |
| 2 引言 | 第25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·Mu7 转座子基因型的确定 | 第26页 |
| ·玉米C 型胞质雄性不育恢复相关基因突变体的筛选 | 第26页 |
| ·高质量DNA 的提取和纯化 | 第26-27页 |
| ·采用改良的SDS 方法提取亲本及突变的基因组DNA | 第26页 |
| ·DNA 的纯化及质量检测 | 第26-27页 |
| ·改良的AFLP 的基本反应程序 | 第27-32页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第27页 |
| ·酶切产物和结头引物连接 | 第27-28页 |
| ·连接反应的接头序列 | 第27-28页 |
| ·接头的制备和连接反应 | 第28页 |
| ·预扩增和选择性扩增的体系及PCR 反应的程序 | 第28-29页 |
| ·预扩增的引物和体系 | 第28-29页 |
| ·选择性扩增的体系和PCR 反应程序 | 第29页 |
| ·选择性扩增产物检测 | 第29-32页 |
| ·扩增DNA 变性 | 第29-30页 |
| ·电泳准备 | 第30页 |
| ·扩增产物的电泳 | 第30页 |
| ·扩增产物的银染检测——聚丙烯酰胺凝胶 NaOH 染色方法 | 第30-32页 |
| ·差异片段的回收和测序 | 第32-34页 |
| ·差异片段的回收 | 第32页 |
| ·差异片段的测序 | 第32-34页 |
| ·差异DNA 片段与pGEM-T 载体的连接 | 第32页 |
| ·电转化和转化子的筛选与鉴定 | 第32-34页 |
| ·RACE 方法获得候选基因部分片段 | 第34-35页 |
| ·总RNA 的抽提 | 第34-35页 |
| ·实验前的准备 | 第34页 |
| ·所需试验试剂 | 第34页 |
| ·抽提RNA | 第34-35页 |
| ·RNA 含量和质量的检测 | 第35页 |
| ·3’RACE 对cDNA 进行序列扩增 | 第35-37页 |
| ·引物的设计 | 第35-36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第36页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第37页 |
| ·PCR 产物的测序 | 第37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·恢复相关基因突变体侧翼序列的克隆 | 第37-41页 |
| ·恢复相关基因突变体的筛选 | 第37-38页 |
| ·玉米 C 型胞质育性恢复相关基因插入突变体的胞质类型的鉴定 | 第38页 |
| ·Cms-C87-1、Mu7、突变体材料中的Mu7 序列扩增 | 第38-39页 |
| ·育性恢复突变体侧翼片段扩增 | 第39-41页 |
| ·模板DNA 质量的检测 | 第39页 |
| ·基因组DNA 的酶切检测 | 第39页 |
| ·DNA 片段的选择性扩增 | 第39-40页 |
| ·Mu-AFLP 选择性扩增电泳检测 | 第40页 |
| ·差异片段的回收和序列分析 | 第40-41页 |
| ·候选基因cDNA 的3’RACE 扩增 | 第41-42页 |
| ·RNA 的检测和RT-PCR 产物检测 | 第41页 |
| ·3’RACE 扩增 | 第41页 |
| ·3’RACE 的测序结果 | 第41-42页 |
| ·候选基因的生物信息学分析 | 第42-46页 |
| ·候选基因序列的电子延伸 | 第42-43页 |
| ·候选基因的克隆分析 | 第43页 |
| ·候选基因中开放阅读框的查找 | 第43-44页 |
| ·候选基因编码蛋白的分子量和等电点分析 | 第44页 |
| ·蛋白质的结构功能域的预测 | 第44-45页 |
| ·候选基因和几种植物同源序列的氨基酸的比较 | 第45-46页 |
| ·系统发生树的构建 | 第46页 |
| ·侯选基因恢复系和不育系中侯选基因的DNA 序列分析 | 第46-47页 |
| 5 结论和讨论 | 第47-50页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·在Mu-AFLP 试验中可能存在的问题 | 第48页 |
| ·选取玉米小花分化时期提取RNA 的原因 | 第48页 |
| ·玉米C 型胞质雄性不育与转录因子TFIIA 的关系 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| ABSTRACT | 第59-60页 |
