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番茄类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及功能分析

摘要第1-10页
Abstract第10-15页
1 引言第15-31页
   ·活性氧产生的途径及其清除活性氧的系统第15-24页
     ·活性氧产生的途径第16-17页
     ·叶绿体内活性氧产生的途径第17-18页
     ·活性氧的作用及其氧化损伤第18-19页
     ·清除活性氧的酶促与非酶促系统第19-22页
     ·有关抗氧化酶系统的基因工程第22-24页
   ·APX 研究进展第24-30页
     ·APX 的结构特点及系统分布第24-27页
     ·APX 的分子功能第27-29页
     ·叶绿体APX 的抗氧化功能第29-30页
   ·本研究目的意义第30-31页
2 材料与方法第31-50页
   ·实验材料第31-32页
     ·植物材料及处理第31页
     ·菌株与质粒第31页
     ·酶及生化试剂第31页
     ·PCR 引物第31-32页
   ·分子生物学实验方法第32-45页
     ·总RNA 的提取(TRIZOL 试剂盒法)第32-33页
     ·反转录cDNA 第一条链的合成第33-34页
     ·目的基因全长cDNA 的分离第34-37页
     ·叶绿体tAPX 基因正义表达载体的构建第37-39页
     ·农杆菌介导转化烟草第39-40页
     ·转基因烟草的验证第40-42页
     ·Northern 杂交分析(参考Sambrook 等,1989)第42-45页
   ·生理生化指标的测定第45-50页
     ·测定种子发芽率第45-46页
     ·测定植株的鲜重、干重第46页
     ·光合速率的测定第46-47页
     ·荧光参数的测定第47页
     ·活性氧清除酶活性测定第47-48页
     ·活性氧含量测定及AsA 含量测定第48页
     ·膜脂伤害程度测定第48-50页
3 结果与分析第50-80页
   ·LetAPX 基因的分离及其特征第50-56页
     ·APX 基因全长的克隆第50-52页
     ·LetAPX 基因序列分析第52-56页
   ·基因表达特性分析第56-58页
     ·LetAPX 在番茄不同器官中的表达量不同第56页
     ·低温诱导LetAPX 的表达第56页
     ·高温诱导LetAPX 的表达第56-57页
     ·盐胁迫诱导LetAPX 的表达第57-58页
     ·干旱胁迫诱导LetAPX 的表达第58页
     ·氧化胁迫诱导LetAPX 的表达第58页
   ·转基因株系的获得及检测第58-63页
     ·正义表达载体pBI-LetAPX 的构建第58-59页
     ·克隆载体的PCR 检测第59-60页
     ·表达载体的PCR 检测第60页
     ·番茄LetAPX 基因转化烟草及转基因植株的分子检测第60-61页
     ·番茄LetAPX 基因在烟草中的表达第61-63页
   ·转 LetAPX 基因烟草的表型特征第63-66页
     ·逆境胁迫下 LetAPX 基因的过量表达提高了烟草种子发芽率第63-64页
     ·逆境胁迫下转基因种苗具有更强的生长势第64-65页
     ·盐胁迫下转基因烟草维持较大的鲜重和干重第65-66页
   ·逆境胁迫下转基因烟草生理生化指标的变化第66-80页
     ·逆境胁迫下转基因烟草光合速率和叶绿素荧光参数的变化第66-71页
       ·低温胁迫下转基因烟草光合速率和叶绿素荧光参数的变化第66-67页
       ·高温胁迫下转基因烟草光合速率和叶绿素荧光参数的变化第67-68页
       ·盐胁迫下转基因烟草光合速率和叶绿素荧光参数的变化第68-70页
       ·干旱胁迫下转基因烟草叶绿素荧光参数的变化第70页
       ·氧化剂胁迫下转基因烟草叶绿素荧光参数的变化第70-71页
     ·逆境胁迫下转基因烟草 APX 和 CAT 活性的变化第71-75页
     ·逆境胁迫下转基因烟草活性氧含量及膜伤害程度的变化第75-80页
4 讨论第80-88页
   ·逆境胁迫与植物活性氧代谢及APX 的作用第80-81页
   ·tAPX 与植物的活性氧清除第81-83页
   ·tAPX 的氨基酸序列分析第83-84页
   ·tAPX 与植物抗逆性表达分析第84-85页
   ·tAPX 与植物的生长发育第85-86页
   ·tAPX 与植物的光破坏防御机制第86-88页
5 结论第88-89页
参考文献第89-99页
附录第99-102页
 附录1 转基因愈伤及小苗第99页
 附录2 盐胁迫下的植株生长情况第99-100页
 附录3 常用缓冲液及培养基的配制第100-102页
致谢第102-103页
攻读学位期间已发表和待发表的论文第103页

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