| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 0 前言 | 第15-25页 |
| ·立题目的及意义 | 第15-16页 |
| ·Agarivorans 属的微生物 | 第16-17页 |
| ·Agarivorans 属微生物的基本性质 | 第16-17页 |
| ·Agarivorans 属微生物的产酶类型 | 第17页 |
| ·褐藻胶及褐藻胶裂解酶 | 第17-20页 |
| ·褐藻细胞壁的多糖组成 | 第17-18页 |
| ·褐藻胶的结构及性质 | 第18-19页 |
| ·褐藻胶裂解酶的研究进展 | 第19-20页 |
| ·褐藻胶裂解酶的应用 | 第20页 |
| ·琼胶及琼胶酶 | 第20-25页 |
| ·红藻细胞壁的多糖组成 | 第20-21页 |
| ·琼胶的结构及性质 | 第21页 |
| ·琼胶酶的研究进展 | 第21-23页 |
| ·琼胶酶的应用 | 第23-25页 |
| 1 菌株 YKW-34 的菌种鉴定及其所产多糖降解酶类型的分析 | 第25-32页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·菌种鉴定 | 第25-26页 |
| ·菌株基因组 DNA 的制备 | 第25-26页 |
| ·16S rRNA 基因的 PCR 扩增及 PCR 产物的克隆 | 第26页 |
| ·DNA 测序及菌种鉴定 | 第26页 |
| ·菌株产酶类型的鉴定 | 第26-28页 |
| ·培养基组成 | 第26-27页 |
| ·培养条件 | 第27页 |
| ·生物量的测定 | 第27页 |
| ·酶活力的测定 | 第27-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-30页 |
| ·菌株 YKW-34 的生长曲线 | 第28页 |
| ·菌种鉴定 | 第28-30页 |
| ·菌株的产酶类型 | 第30页 |
| ·小结 | 第30-32页 |
| 2 Agarivorans albus YKW-34 产褐藻胶裂解酶的培养基组成及培养条件的优化 | 第32-40页 |
| ·材料与方法 | 第32-33页 |
| ·试剂与仪器 | 第32页 |
| ·培养基组成及培养条件 | 第32-33页 |
| ·生物量及酶活力的测定 | 第33页 |
| ·数据的统计学分析方法 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-39页 |
| ·碳源的优化 | 第33-35页 |
| ·氮源的优化 | 第35页 |
| ·碳氮比及接种量的优化 | 第35-36页 |
| ·种龄的优化 | 第36-37页 |
| ·初始pH 值的优化 | 第37-38页 |
| ·培养温度的优化 | 第38-39页 |
| ·最适培养条件下的生长曲线及产酶曲线 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 3 Agarivorans albus YKW-34 产褐藻胶裂解酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第40-55页 |
| ·材料与方法 | 第40-44页 |
| ·试剂与仪器 | 第40页 |
| ·菌株培养 | 第40页 |
| ·褐藻胶裂解酶活力的测定 | 第40-41页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第41-42页 |
| ·褐藻胶裂解酶的分离纯化 | 第42页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-43页 |
| ·褐藻胶裂解酶等电点的测定 | 第43页 |
| ·褐藻胶裂解酶温度和pH 活性及稳定性的测定 | 第43页 |
| ·金属离子及各种有机试剂对褐藻胶裂解酶活力影响的测定 | 第43页 |
| ·褐藻胶裂解酶的底物专一性分析 | 第43-44页 |
| ·褐藻胶裂解酶的动力学性质的测定 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-54页 |
| ·酶的纯化 | 第44-46页 |
| ·酶比活力 | 第46-48页 |
| ·酶的分子量及等电点 | 第48-49页 |
| ·酶的温度及pH 性质 | 第49-50页 |
| ·金属离子及各种有机试剂对酶活力影响 | 第50-53页 |
| ·酶的底物专一性 | 第53页 |
| ·酶的动力学性质 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 4 Agarivorans albus YKW-34 产琼胶酶的培养基组成及培养条件的优化 | 第55-69页 |
| ·材料与方法 | 第55-59页 |
| ·试剂与仪器 | 第55页 |
| ·菌株培养 | 第55页 |
| ·生物量及酶活力的测定 | 第55-56页 |
| ·单因素分析 | 第56页 |
| ·统计学设计 | 第56-59页 |
| ·Plackett-Burman 设计 | 第56-58页 |
| ·响应面设计 | 第58-59页 |
| ·琼胶酶的原位检测 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-67页 |
| ·最适碳源、氮源、培养温度的确定 | 第59-62页 |
| ·重要影响因素的筛选 | 第62页 |
| ·重要影响因素的优化 | 第62-66页 |
| ·优化前后菌株的生长曲线及产酶曲线的比较 | 第66-67页 |
| ·琼胶酶的原位检测 | 第67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 5 Agarivorans albus YKW-34 产琼胶酶 AgaA34 及 AgaB34 的分离纯化及 AgaA34 的酶学性质研究 | 第69-82页 |
| ·材料与方法 | 第69-71页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·菌株培养 | 第69页 |
| ·琼胶酶活力及蛋白质含量的测定 | 第69-70页 |
| ·琼胶酶的分离纯化 | 第70页 |
| ·蛋白质电泳 | 第70页 |
| ·琼胶酶氮端氨基酸序列的测定 | 第70页 |
| ·琼胶酶温度和pH 活性及稳定性的测定 | 第70-71页 |
| ·琼胶酶的底物专一性及裂解方式的分析 | 第71页 |
| ·各种试剂对琼胶酶活力影响的测定 | 第71页 |
| ·琼胶酶的动力学性质的测定 | 第71页 |
| ·酶解产物的分析 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-81页 |
| ·AgaA34 及 AgaB34 的纯化 | 第71-74页 |
| ·AgaA34 及 AgaB34 的氮端序列 | 第74-75页 |
| ·AgaA34 的温度及pH 性质 | 第75-76页 |
| ·AgaA34 的底物专一性及裂解方式 | 第76页 |
| ·各种试剂对 AgaA34 活力影响 | 第76-77页 |
| ·AgaA34 的动力学性质 | 第77-78页 |
| ·AgaA34 酶解产物 | 第78-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 6 Agarivorans albus YKW-34 产琼胶酶 AgaB34 的基因克隆、重组表达及重组酶的性质研究 | 第82-102页 |
| ·材料与方法 | 第82-89页 |
| ·试剂与仪器 | 第82页 |
| ·菌株及培养条件 | 第82-83页 |
| ·琼胶酶的基因克隆 | 第83-87页 |
| ·A. albus 基因组 DNA 的制备、酶切及片段的纯化 | 第83-84页 |
| ·pUC18 质粒 DNA 的制备、酶切及去磷酸化 | 第84-85页 |
| ·基因组 DNA 片段与载体的连接 | 第85页 |
| ·E. coli 感受态细胞的制备及重组质粒的转化 | 第85-86页 |
| ·阳性克隆的筛选及基因测序 | 第86页 |
| ·基因序列生物学数据的分析 | 第86-87页 |
| ·重组琼胶酶的胞外表达 | 第87-88页 |
| ·含6×His-tagged 琼胶酶基因载体的构建 | 第87-88页 |
| ·6×His-tagged 琼胶酶的表达 | 第88页 |
| ·重组琼胶酶的纯化 | 第88页 |
| ·琼胶酶活力的测定 | 第88页 |
| ·重组琼胶酶基本酶学性质测定 | 第88页 |
| ·重组琼胶酶的酶解产物分析 | 第88页 |
| ·琼胶酶基因序列号 | 第88-89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-101页 |
| ·琼胶酶基因的克隆 | 第89-92页 |
| ·琼胶酶氨基酸序列的分析 | 第92-94页 |
| ·重组琼胶酶的表达和纯化 | 第94-96页 |
| ·重组琼胶酶的基本酶学性质 | 第96-99页 |
| ·重组琼胶酶的酶解产物 | 第99-100页 |
| ·原始琼胶酶与重组琼胶酶的比较 | 第100-101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| 论文总结及创新点 | 第102-104页 |
| 后期工作展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 附录 | 第112-117页 |
| 个人简历 | 第117-118页 |
| 在学期间发表的论文 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
