| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一部分 引言 | 第10-25页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因 | 第11-21页 |
| ·无毒基因的功能 | 第17-18页 |
| ·稻瘟病菌无毒基因的研究策略 | 第18-20页 |
| ·无毒基因的研究意义 | 第20-21页 |
| ·分泌蛋白近期研究 | 第21-23页 |
| ·分泌蛋白的结构特征 | 第21-22页 |
| ·分泌蛋白分泌途径 | 第22页 |
| ·分泌蛋白的生物学作用 | 第22-23页 |
| ·预测分泌蛋白基因的功能分析在81278ZB15 无毒基因研究中的意义 | 第23-25页 |
| ·分泌蛋白与无毒基因的关系 | 第23页 |
| ·81278ZB15 中无毒基因簇Avr-Pi1、Avr-Pi2 和Avr-Pi4a 的定位 | 第23-25页 |
| 第二部 分材料与方法 | 第25-45页 |
| ·供试菌株、质粒、试剂和培养基等材料 | 第25-29页 |
| ·供试稻瘟病菌菌株 | 第25页 |
| ·供试水稻 | 第25-26页 |
| ·供试质粒 | 第26-29页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·OE 载体的构建 | 第31-35页 |
| ·编码假定分泌蛋白基因的ORF 扩增与PCR 产物的纯化 | 第31页 |
| ·小量质粒DNA 的制备 | 第31-32页 |
| ·pDL1 vector 的酶切 | 第32页 |
| ·酶切产物回收 | 第32-33页 |
| ·酵母同源重组 | 第33-34页 |
| ·酵母同源重组转化子质粒的提取 | 第34页 |
| ·大肠杆菌DH_(5α)超级感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·酵母质粒的转化 | 第35页 |
| ·大肠杆菌克隆子的验证 | 第35页 |
| ·敲除载体的构建 | 第35-39页 |
| ·A、B 片段的扩增 | 第35-36页 |
| ·A、B 片段的TA 克隆 | 第36页 |
| ·大肠杆菌DH_(5α)感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·质粒酶切与连接 | 第37-39页 |
| ·稻瘟病菌的遗传转化 | 第39-41页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第39-40页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的转化 | 第40页 |
| ·稻瘟病菌原生质体转化子的验证 | 第40-41页 |
| ·稻瘟病菌总RNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·cDNA的逆转录 | 第42页 |
| ·稻瘟病菌表型分析 | 第42-44页 |
| ·稻瘟病菌菌落生长速度测定 | 第42页 |
| ·分生孢子的培养 | 第42-43页 |
| ·产孢量统计及细胞形态观察 | 第43页 |
| ·孢子萌发及附着胞形成试验 | 第43页 |
| ·洋葱内表皮侵染观察 | 第43-44页 |
| ·稻瘟病菌致病性性测定 | 第44-45页 |
| ·育苗和接种方法 | 第44页 |
| ·病斑调查和定级 | 第44-45页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第45-71页 |
| ·BAC 克隆子805L15 中分泌蛋白的预测、筛选及其生物信息学分析 | 第45-49页 |
| ·BAC 克隆子805L15 中的基因预测 | 第45-46页 |
| ·BAC 克隆子805L15 中假定分泌蛋白生物信息学分析 | 第46-49页 |
| ·假定分泌蛋白基因的过量表达 | 第49-63页 |
| ·OE 载体的构建 | 第49-52页 |
| ·OE 转化子的获得及其验证 | 第52-57页 |
| ·OE 转化子表型分析 | 第57-60页 |
| ·OE 转化子致病性分析 | 第60-63页 |
| ·编码分泌蛋白基因的敲除 | 第63-71页 |
| ·编码分泌蛋白基因敲除载体的构建 | 第63-64页 |
| ·编码分泌蛋白基因敲除突变体的验证 | 第64-67页 |
| ·敲除突变体表型分析 | 第67-69页 |
| ·敲出突变体致病性分析 | 第69-71页 |
| 第四部分 总结与讨论 | 第71-74页 |
| ·7 个假定分泌蛋白的功能与无毒基因无关 | 第71页 |
| ·BAC 克隆子805L15 拼接 | 第71-72页 |
| ·假定分泌蛋白的预测和筛选 | 第72-73页 |
| ·转化子表型的差异 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 附录1. 培养基 | 第80-82页 |
| 附录2. 生化试剂 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
