| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-21页 |
| ·副结核病的病原简介 | 第8-9页 |
| ·副结核病的危害 | 第9页 |
| ·牛副结核病的分布和控制 | 第9-10页 |
| ·牛副结核病的检测方法 | 第10-14页 |
| ·免疫胶体金研究进展及其在动物医学方面的应用 | 第14-20页 |
| ·研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·试剂和仪器 | 第21-23页 |
| ·原核表达重组蛋白主要试剂 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE 电泳主要试剂 | 第21页 |
| ·Wersten-blot 主要试剂 | 第21页 |
| ·蛋白纯化主要试剂 | 第21-22页 |
| ·胶体金试纸条制备主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·牛副结核分支杆菌基因片段的合成 | 第23页 |
| ·抗原表位筛选 | 第23页 |
| ·基因筛选与人工合成 | 第23页 |
| ·合成产物培养 | 第23页 |
| ·原核表达载体的构建与表达 | 第23-27页 |
| ·PGEM -map0862-2154c 质粒的提取 | 第23-24页 |
| ·PGEM -map0862-2154c 质粒的鉴定 | 第24页 |
| ·PGEM -map0862-2154c 质粒与原核表达载体pET28a(+)的酶切 | 第24-25页 |
| ·map0862-2154c 与原核表达载体pET28a(+)的回收 | 第25页 |
| ·map0862-2154c 与pET28a(+)载体的连接 | 第25页 |
| ·用氯化钙法制备感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·重组质粒pET0862-2154c 的提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pET0862-2154c 的鉴定 | 第27页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第27-30页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第27-28页 |
| ·表达产物的Western blot 检测 | 第28-29页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| ·免疫胶体金层析方法的建立 | 第30-36页 |
| ·试纸条制备的主要溶液及材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-45页 |
| ·抗原表位筛选 | 第36页 |
| ·基因筛选 | 第36页 |
| ·PEGM-map0862-2154c 质粒的酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·map0862-2154c 与pET28a(+)重组转化 | 第37页 |
| ·重组质粒pET0862-2154c 双酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·MAP0862-2154c 抗原蛋白SDS-PAGE 及Western blot 结果 | 第38-39页 |
| ·MAP0862-2154c 蛋白的SDS-PAGE 结果 | 第38页 |
| ·MAP0862-2154c 蛋白纯化 | 第38-39页 |
| ·MAP0862-2154c 蛋白Wersten blot 检测 | 第39页 |
| ·纯化抗原蛋白MAP0862-2154c 浓度测定结果 | 第39页 |
| ·免疫胶体金试纸条的制备 | 第39-45页 |
| ·胶体金-SPA 稀释结果 | 第39-40页 |
| ·纯化透析后抗原蛋白MAP0862-2154c 质量鉴定 | 第40页 |
| ·牛IgG 抗体处理前后结果比较 | 第40-41页 |
| ·试纸条反应条件的优化 | 第41页 |
| ·试纸条组成材料及NC 膜包被浓度的筛选 | 第41-43页 |
| ·免疫胶体金试纸条性能测定 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| ·抗原表位的筛选 | 第45页 |
| ·表达系统的筛选 | 第45-46页 |
| ·目的基因的连接表达与鉴定 | 第46页 |
| ·免疫金试纸条的制备 | 第46-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
