| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·牛结核病概述 | 第10页 |
| ·病原学 | 第10-11页 |
| ·流行病学 | 第11-13页 |
| ·发病机理 | 第13-14页 |
| ·免疫机理 | 第14页 |
| ·主要抗原蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
| ·ESAT-6 家族蛋白 | 第15页 |
| ·CFP 系列蛋白 | 第15页 |
| ·MPB 系列蛋白 | 第15-17页 |
| ·抗原85 复合蛋白质(A985) | 第17页 |
| ·诊断技术研究进展 | 第17-22页 |
| ·细菌学检查法 | 第17-18页 |
| ·结核菌素皮内变态反应(Tuberculin skin test TST ) | 第18页 |
| ·血清学诊断方法 | 第18-20页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·所需的试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·抗原表位的筛选 | 第23页 |
| ·目的基因的获得 | 第23-25页 |
| ·克隆菌的培养 | 第23-24页 |
| ·克隆质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·目的基因与原核表达载体pET28a(+)的回收 | 第25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| ·用氯化钙法制备JM109 感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·酶切产物的连接 | 第26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·重组质粒pET28a-mpb-70-83-esat-6 的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒pET28a-mpb-70-83-esat-6 的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·mpb-70-83-esat-6 基因的原核表达 | 第27-28页 |
| ·mpb-70-83-esat-6 的诱导表达 | 第27页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第27-28页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·表达菌的大量收集 | 第28页 |
| ·样品的预处理 | 第28页 |
| ·装柱 | 第28-29页 |
| ·过柱 | 第29页 |
| ·纯化蛋白的Western blot 鉴定 | 第29-30页 |
| ·电转印 | 第29页 |
| ·免疫染色 | 第29-30页 |
| ·蛋白的复性和浓缩 | 第30页 |
| ·蛋白的复性 | 第30页 |
| ·复性蛋白的浓缩 | 第30页 |
| ·胶体金免疫层析方法的初步建立 | 第30-32页 |
| ·质控线抗体的制备 | 第30-31页 |
| ·检测线抗原和质控线抗体的包被 | 第31页 |
| ·金标垫的制备 | 第31页 |
| ·样品垫的处理 | 第31页 |
| ·试纸条的组装 | 第31-32页 |
| ·试纸条反应条件的优化 | 第32页 |
| ·样品垫处理液成分的优化 | 第32页 |
| ·结合垫处理液的优化 | 第32页 |
| ·金标SPA 稀释倍数的选择 | 第32页 |
| ·检测线抗原的最佳包被浓度 | 第32页 |
| ·试纸条检测判定方法 | 第32-33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·敏感性试验 | 第33页 |
| ·试纸盒的初步应用 | 第33页 |
| ·稳定性试验 | 第33-34页 |
| 3. 结果 | 第34-42页 |
| ·抗原表位的筛选 | 第34页 |
| ·目的基因的酶切 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的复性和浓缩 | 第37页 |
| ·质控线包被抗体的选择 | 第37-38页 |
| ·试纸条的组装 | 第38-39页 |
| ·试纸条反应条件的优化 | 第39页 |
| ·样品垫处理液成分的优化 | 第39页 |
| ·金标垫处理液的优化 | 第39页 |
| ·金标SPA 稀释倍数的选择结果 | 第39页 |
| ·检测线抗原包被浓度 | 第39页 |
| ·试纸条特异性试验 | 第39-40页 |
| ·试纸条敏感性试验 | 第40页 |
| ·试纸条的初步应用 | 第40-41页 |
| ·稳定性试验 | 第41-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-45页 |
| ·诊断抗原的选择 | 第42页 |
| ·抗原表位的筛选 | 第42-43页 |
| ·表达载体的选择 | 第43页 |
| ·目的蛋白的纯化和复性 | 第43-44页 |
| ·试纸条的组装 | 第44页 |
| ·试纸条的初步应用 | 第44-45页 |
| 5. 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录 | 第52-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
