| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 食管癌简介 | 第10页 |
| 1.2 食管癌的主要病症 | 第10页 |
| 1.3 食管癌的流行病学研究 | 第10-11页 |
| 1.4 食管癌发病因素分析 | 第11-16页 |
| 1.4.1 环境因素 | 第11-13页 |
| 1.4.2 遗传因素 | 第13-16页 |
| 1.5 连锁不平衡 | 第16-17页 |
| 1.5.1 连锁不平衡的基本概念 | 第16页 |
| 1.5.2 连锁不平衡的因素 | 第16-17页 |
| 1.6 金属基质蛋白酶 | 第17-19页 |
| 1.6.1 金属基质蛋白酶简介 | 第17-19页 |
| 1.6.2 mmp3的功能与食管癌的关系 | 第19页 |
| 1.7 实验方案和课题意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 试剂与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 设备 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 SNPs的选择 | 第22-23页 |
| 2.2.2 PCR引物与测序引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.3 细胞培养方法 | 第24-25页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第25页 |
| 2.2.5 DNA回收方法的建立 | 第25-27页 |
| 2.2.6 感受态制备及转化 | 第27页 |
| 2.2.7 质粒DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.8 构建GFP表达载体 | 第28-29页 |
| 2.2.9 磷酸钙转染法 | 第29页 |
| 2.2.10 TrizoL法提取癌细胞的总RNA | 第29-30页 |
| 2.2.11 RT-PCR程序 | 第30-33页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第33-49页 |
| 3.1 基因组DNA提取 | 第33页 |
| 3.2 梯度PCR寻找最适TM值 | 第33-34页 |
| 3.3 最适TM值PCR | 第34-35页 |
| 3.4 回收方法选择 | 第35页 |
| 3.5 不同肿瘤细胞mmp3基因5'调控区测序比对结果 | 第35-37页 |
| 3.6 基于M-L算法的DNA序列比对及进化树生成 | 第37页 |
| 3.7 取样人群来源 | 第37-38页 |
| 3.8 5'调控区关键位点基因分型统计 | 第38-39页 |
| 3.9 mmp3基因SNP5'调控区关键SNP位点Logistic分析 | 第39-41页 |
| 3.9.1 rs617819的Logistic分析 | 第39-41页 |
| 3.10 基因SNP连锁分析 | 第41-43页 |
| 3.11 TA载体连接EC-1调控区片段 | 第43-45页 |
| 3.11.1 蓝白斑筛选 | 第43页 |
| 3.11.2 提取重组质粒 | 第43-44页 |
| 3.11.3 获取调控区目标片段 | 第44-45页 |
| 3.12 EC-1调控区连接到表达载体pEGFP-N1 | 第45-47页 |
| 3.12.1 菌落PCR | 第45页 |
| 3.12.2 提取EC-1与表达载体pEGFP-N1重组质粒 | 第45-46页 |
| 3.12.3 酶切验证 | 第46-47页 |
| 3.13 磷酸钙转染结果 | 第47页 |
| 3.14 食管癌EC-1总RNA提取 | 第47-48页 |
| 3.15 反转录PCR(RT-PCR) | 第48-49页 |
| 第四章 讨论 | 第49-54页 |
| 4.1 转录因子 | 第49-50页 |
| 4.2 关于回收 | 第50页 |
| 4.3 关于基质金属蛋白酶3 | 第50-51页 |
| 4.4 Logistic回归分析 | 第51页 |
| 4.5 基因SNP连锁 | 第51-52页 |
| 4.6 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
