| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 1.1 维管束及其发育调控 | 第9-10页 |
| 1.1.1 维管束简介 | 第9页 |
| 1.1.2 维管束的发育调控 | 第9-10页 |
| 1.2 基因编辑技术的发展与应用 | 第10-14页 |
| 1.2.1 基因编辑技术的发展 | 第10-11页 |
| 1.2.2 CRISPR基因编辑系统的结构和作用 | 第11-13页 |
| 1.2.3 CRISPR基因编辑系统的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 pMAL原核表达载体的功能与应用 | 第14-16页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 pC1300-Cas9-gRNA-sm-Nvas敲除载体的构建及遗传转化 | 第17-43页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.2.1 烟草品种 | 第17页 |
| 2.2.2 菌株及载体 | 第17-18页 |
| 2.2.3 主要试剂及配方 | 第18-21页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.3.1 pC1300-Cas9-gRNA-sm-Nvas敲除载体的构建 | 第21-28页 |
| 2.3.2 阳性克隆电激转化农杆菌 | 第28-29页 |
| 2.3.3 农杆菌介导的pC1300-Cas9-gRNA-sm-Nvas烟草遗传转化 | 第29-31页 |
| 2.3.4 转基因T0代植株的阳性鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.5 转基因T0代植株的表型分析及切片观察 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-41页 |
| 2.4.1 pC1300-Cas9-gRNA-sm-Nvas敲除载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.4.2 pC1300-Cas9-gRNA-sm-Nvas敲除载体的遗传转化 | 第35-37页 |
| 2.4.3 转基因苗的阳性鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4.4 转基因苗的基因敲除检测 | 第38-39页 |
| 2.4.5 转基因T0代植株的表型分析与切片观察 | 第39-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 sm-Nvas原核表达载体构建及其蛋白纯化 | 第43-62页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-47页 |
| 3.2.1 烟草品种 | 第43页 |
| 3.2.2 载体及菌株 | 第43-44页 |
| 3.2.3 主要试剂及配方 | 第44-46页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.3.1 pMAL-p5x-sm-Nvas原核表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 3.3.2 pMAL-p5x-sm-Nvas原核表达载体的诱导表达 | 第50-52页 |
| 3.4 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.4.1 pMAL-p5x-sm-Nvas原核表达载体的构建 | 第52-56页 |
| 3.4.2 pMAL-p5x-sm-Nvas原核表达载体的诱导表达 | 第56-59页 |
| 3.4.3 表达蛋白纯化 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参与的学术会议 | 第71页 |
