| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶概述 | 第13-14页 |
| 1.2 葡萄糖检测的意义 | 第14页 |
| 1.3 葡萄糖检测技术的发展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 物理法测定葡萄糖浓度 | 第14-15页 |
| 1.3.2 生物传感器测定葡萄糖 | 第15-16页 |
| 1.4 葡萄糖生物传感器的分类 | 第16-18页 |
| 1.4.1 酶电化学葡萄糖传感器 | 第16-17页 |
| 1.4.2 基于纳米材料的葡萄糖传感器 | 第17-18页 |
| 1.5 毕赤酵母表达系统 | 第18-21页 |
| 1.5.1 毕赤酵母表达系统概述 | 第18-19页 |
| 1.5.2 外源蛋白在毕赤酵母中高表达的方法 | 第19-21页 |
| 1.5.2.1 信号肽序列对毕赤酵母表达的影响 | 第20页 |
| 1.5.2.2 启动子达对毕赤酵母表的影响 | 第20页 |
| 1.5.2.3 基因剂量对毕赤酵母表达的影响 | 第20页 |
| 1.5.2.4 菌株和载体对毕赤酵母表达的影响 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 葡萄糖氧化酶G418体内多拷贝子在毕赤酵母中的表达 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.1.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 培养基及相关溶液 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 仪器设备 | 第25页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌质粒提取 | 第25页 |
| 2.2.2.2 GOx定点突变体表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.2.3 含有突变基因的DNA回收 | 第26页 |
| 2.2.2.4 定点突变PCR产物与pPIC9K载体连接 | 第26-27页 |
| 2.2.2.5 转入TG1感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.2.6 重组质粒双酶切验证 | 第28页 |
| 2.2.2.7 阳性转化子保存 | 第28页 |
| 2.2.2.8 电转化毕赤酵母GS115 | 第28页 |
| 2.2.2.9 G418筛选多拷贝转化子 | 第28-29页 |
| 2.2.2.10 毕赤酵母系统分泌表达 | 第29页 |
| 2.2.2.11 毕赤酵母拷贝数鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2.12 多拷贝重组菌酶活测定 | 第29页 |
| 2.2.2.13 蛋白质浓缩及分子量测定 | 第29-30页 |
| 2.2.2.14 蛋白质浓度测定 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 pPIC9K-GOx的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.2 质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 dscaldsacGOx在毕赤酵母中的表达 | 第32-33页 |
| 2.3.4 G418在GS115体内多拷贝筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.5 多拷贝重组拷贝数鉴定和酶活测定 | 第34-35页 |
| 2.4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 葡萄糖氧化酶pPICZαA体外多拷贝子在毕赤酵母中的表达 | 第36-44页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 材料与方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.3 结果分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 pPICZαA-GOx的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.3.3 多拷贝pPICzɑA-GOx重组质粒构建和鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组菌拷贝数鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.5 拷贝数对GOx酶活力的影响 | 第43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 TiO_2纳米晶葡萄糖氧化酶电极的制备及性能测定 | 第44-53页 |
| 4.1 引言 | 第44-45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第46页 |
| 4.3 实验方法和步骤 | 第46-48页 |
| 4.3.1 制备纳米二氧化钛水悬液 | 第46页 |
| 4.3.2 配置TMB底物溶液 | 第46-47页 |
| 4.3.3 配置缓冲溶液 | 第47页 |
| 4.3.4 TiO_2/GOx修饰酶电极的制作 | 第47页 |
| 4.3.5 纳米二氧化钛的红外光谱检测 | 第47页 |
| 4.3.6 葡萄糖氧化酶修饰电极表征 | 第47-48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-52页 |
| 4.4.1 红外光谱分析 | 第48页 |
| 4.4.2 TiO_2过氧化物模拟酶催化活性 | 第48-49页 |
| 4.4.3 GOx在修饰电极上的直接电化学 | 第49-52页 |
| 4.5 结论 | 第52-53页 |
| 结论与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
