| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1 西藏高寒草甸土壤的基本特征 | 第17页 |
| 2 土壤宏基因组文库策略 | 第17-24页 |
| ·土壤宏基因组文库的研究内容 | 第17-18页 |
| ·土壤宏基因组文库的研究方法 | 第18-23页 |
| ·样品DNA的提取 | 第18-19页 |
| ·宏基因组宿主菌株 | 第19-20页 |
| ·宏基因组文库的载体 | 第20页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第20-21页 |
| ·宏基因组学的应用 | 第21-22页 |
| ·宏基因组文库存在的问题 | 第22-23页 |
| ·测序技术为基础的宏基因组体系 | 第23-24页 |
| 3 PKS基因的研究进展 | 第24-28页 |
| ·Ⅰ型PKS | 第24-25页 |
| ·Ⅱ型PKS | 第25页 |
| ·Ⅲ型PKS | 第25-26页 |
| ·NRPS及杂合PKS/NRPS | 第26-28页 |
| ·异源表达聚酮化合物的培养基 | 第27-28页 |
| ·异源表达宿主 | 第28页 |
| 4 南方根结线虫生物防治研究进展 | 第28-30页 |
| ·线虫天敌微生物 | 第28-30页 |
| ·线虫天敌细菌 | 第28-29页 |
| ·线虫生防真菌 | 第29页 |
| ·线虫天敌线虫 | 第29页 |
| ·杀线虫放线菌 | 第29-30页 |
| ·生物防治根结线虫的前景 | 第30页 |
| 5 松材线虫防治研究进展 | 第30-31页 |
| 6 研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 7 科学问题、研究内容和预期结果 | 第32-34页 |
| ·科学问题 | 第32页 |
| ·研究内容 | 第32-33页 |
| ·预期结果 | 第33-34页 |
| 第二章 土壤总DNA的提取方法的比较 | 第34-43页 |
| 1 材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·土壤样品 | 第34-35页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·直接法提取土壤微生物总DNA | 第36页 |
| ·间接法提取土壤微生物总DNA | 第36-37页 |
| ·DNA的纯度及效率检测 | 第37页 |
| ·16S rDNA验证 | 第37页 |
| ·PKS基因验证 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·DNA纯度的检测 | 第38页 |
| ·不同土壤样品DNA产率的比较 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增效率检测 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 4 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 土壤宏基因组PKS基因和NRPS基因多样性及系统发育分析 | 第43-56页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·土壤样品 | 第44页 |
| ·仪器及试剂 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·土壤总DNA的提取 | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·克隆 | 第45页 |
| ·测序及序列分析 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-55页 |
| ·土壤总DNA的提取 | 第46页 |
| ·PCR扩增PKS基因KS域、序列分析及系统发育分析 | 第46-51页 |
| ·NRPS基因A域系统发育分析 | 第51-55页 |
| 3 讨论 | 第55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 土壤宏基因组文库的构建 | 第56-65页 |
| 1 材料与方法 | 第56-58页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·土壤样品 | 第56页 |
| ·仪器及试剂 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| ·总DNA提取 | 第57页 |
| ·Fosmid文库的构建 | 第57-58页 |
| ·Fosmid宏基因组文库的特征分析 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-63页 |
| ·土壤微生物DNA的电泳检测 | 第58-59页 |
| ·Fosmid文库特征分析 | 第59-63页 |
| ·Fosmid文库插入片段分析 | 第59-60页 |
| ·Fosmid文库插入片段Not Ⅰ酶切电泳检测 | 第60-61页 |
| ·克隆的稳定性检测 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 4 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 土壤宏基因组文库PKS基因的筛选及杀南方根结线虫活性评价 | 第65-82页 |
| 1 材料与方法 | 第65-70页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·文库和菌株 | 第65-66页 |
| ·供试线虫和黄瓜品种 | 第66页 |
| ·引物 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-70页 |
| ·超级池和二级池文库的构建 | 第66页 |
| ·PKS基因的筛选 | 第66-67页 |
| ·KS DNA序列与氨基酸序列系统进化关系的分析 | 第67页 |
| ·杀线虫活性测定 | 第67页 |
| ·亚克隆文库的构建和测序 | 第67-69页 |
| ·K99培养时间对杀线虫活性的影响 | 第69页 |
| ·K99对南方根结线虫温室盆栽防效实验 | 第69-70页 |
| ·K99发酵液对松材线虫生长的影响 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-80页 |
| ·PKS基因的筛选 | 第70-72页 |
| ·PKS基因杀线虫室内生物测定 | 第72-74页 |
| ·Fosmid克隆K99亚克隆文库的构建和测序 | 第74-78页 |
| ·K99培养时间对杀线虫活性的影响 | 第78-79页 |
| ·K99温室盆栽实验 | 第79-80页 |
| ·K99在灰霉上对松材线虫生长发育的影响 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-81页 |
| 4 小结 | 第81-82页 |
| 第六章 K99活性物质的理化性质初步研究 | 第82-90页 |
| 1 材料与方法 | 第82-85页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·菌株及线虫 | 第82页 |
| ·仪器和试剂 | 第82-83页 |
| ·方法 | 第83-85页 |
| ·克隆菌K99发酵菌液的制备 | 第83页 |
| ·发酵液初提物的制备 | 第83页 |
| ·初提物热稳定性测定 | 第83页 |
| ·初提物活性测定 | 第83-84页 |
| ·粗提物薄层层析物质分析 | 第84页 |
| ·粗提物薄层层析活性追踪 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-88页 |
| ·K99粗提物杀线虫活性测定 | 第85页 |
| ·溶剂的筛选 | 第85页 |
| ·粗提物的热稳定性测定 | 第85-86页 |
| ·薄层层析物质分析 | 第86-87页 |
| ·薄层层析活性物质追踪 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 4 小结 | 第89-90页 |
| 第七章 放线菌F001对松材线虫致死活性研究 | 第90-103页 |
| 1 材料与方法 | 第90-93页 |
| ·材料 | 第90-91页 |
| ·菌株 | 第90页 |
| ·供试线虫 | 第90-91页 |
| ·仪器及试剂 | 第91页 |
| ·方法 | 第91-93页 |
| ·杀线虫活性的测定 | 第91页 |
| ·杀线虫放线菌发酵液发酵条件的优化 | 第91-92页 |
| ·10L发酵罐条件的优化 | 第92页 |
| ·放线菌DNA提取 | 第92页 |
| ·PCR扩增16s rDNA、KS、NRPS基因 | 第92-93页 |
| ·放线菌发酵液热稳定性 | 第93页 |
| ·放线菌发酵液对在小生境中对松材线虫生长的影响 | 第93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-101页 |
| ·放线菌对南方根结线虫的杀线活性的测定 | 第93页 |
| ·放线菌对松材线虫的杀线虫活性的测定 | 第93-94页 |
| ·放线菌的培养条件优化 | 第94-98页 |
| ·培养时间 | 第94-95页 |
| ·培养温度 | 第95-96页 |
| ·起始pH值 | 第96页 |
| ·摇床转速的优化 | 第96-97页 |
| ·摇瓶装液量的优化 | 第97页 |
| ·10L发酵罐条件的优化 | 第97-98页 |
| ·放线菌的PKS和NRPS基因的克隆和16S rRNA的分析 | 第98-100页 |
| ·放线菌发酵菌液的热稳定性 | 第100页 |
| ·放线菌在松材线虫生境的杀线虫活性 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 第八章 全文总结 | 第103-105页 |
| 1 结论 | 第103-104页 |
| 2 需要继续研究的内容 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 附录 | 第112-115页 |
| 1 英文缩略表 | 第112-113页 |
| 2 对南方根结线虫盆栽防效试验 | 第113-114页 |
| 3 对松材线虫小生境防效试验 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 作者简介 | 第116页 |
