| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 糙皮侧耳概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 糙皮侧耳分类和培养 | 第10页 |
| 1.1.2 糙皮侧耳的食药用价值 | 第10-11页 |
| 1.1.3 糙皮侧耳的经济价值 | 第11页 |
| 1.2 糙皮侧耳遗传转化研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 传统糙皮侧耳转化方法 | 第11-12页 |
| 1.2.2 电激转化法 | 第12页 |
| 1.2.3 基因枪法 | 第12页 |
| 1.2.4 限制酶介导的DNA整合法 | 第12-13页 |
| 1.3 启动子和筛选标记 | 第13-14页 |
| 1.3.1 糙皮侧耳基因启动子 | 第13页 |
| 1.3.2 筛选标记 | 第13-14页 |
| 1.4 基因片段连接方法概述 | 第14-15页 |
| 1.4.1 传统基因连接方式 | 第14页 |
| 1.4.2 重叠PCR快速连接基因片段 | 第14-15页 |
| 1.5 真菌多糖研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5.1 真菌多糖的种类 | 第15页 |
| 1.5.2 真菌多糖的药用价值 | 第15-16页 |
| 1.5.3 真菌多糖的提取方法 | 第16-17页 |
| 1.6 构建糙皮侧耳多糖高产菌株意义 | 第17-18页 |
| 1.7 糙皮侧耳葡聚糖高产菌株构建方法 | 第18-19页 |
| 1.8 研究内容和技术路线 | 第19-20页 |
| 1.9 本章小结 | 第20-21页 |
| 2.同源重组片段的构建 | 第21-32页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 培养基配方 | 第21页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第22页 |
| 2.2.5 仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.3.1 糙皮侧耳天达300基因组总DNA的提取 | 第23页 |
| 2.3.2 同源重组序列构建引物的设计 | 第23-26页 |
| 2.3.3 GPD启动子的扩增 | 第26页 |
| 2.3.4 同源重组序列左右臂的扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.5 hph抗性基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.6 第一个同源重组片段的连接 | 第28页 |
| 2.3.7 第二个同源重组片段的连接 | 第28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.4.1 糙皮侧耳天达300基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.4.2 第一套引物扩增结果 | 第29页 |
| 2.4.3 第二套引物扩增结果 | 第29页 |
| 2.4.4 第一个同源重组片段的融合与测序 | 第29-30页 |
| 2.4.5 第二个同源重组片段的融合与测序 | 第30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-32页 |
| 3.糙皮侧耳遗传转化体系及多糖高产菌株的构建 | 第32-38页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32页 |
| 3.2.1 菌种 | 第32页 |
| 3.2.2 试剂与培养基 | 第32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 3.3.1 原生质体转化法 | 第32-33页 |
| 3.3.2 脂质体转化法 | 第33-34页 |
| 3.4 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.4.1 原生质体制备 | 第34-35页 |
| 3.4.2 研磨转化适宜介质的筛选 | 第35页 |
| 3.4.3 转化子的初筛选 | 第35-36页 |
| 3.4.4 转化子的复筛 | 第36页 |
| 3.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 4.糙皮侧耳多糖高产菌株的筛选及验证 | 第38-46页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 实验材料 | 第38页 |
| 4.2.1 菌种 | 第38页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第38页 |
| 4.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 4.3.1 转化子基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 4.3.2 转化子基因组RNA的提取与反转录 | 第38-39页 |
| 4.3.3 转化子基因验证 | 第39页 |
| 4.3.4 糙皮侧耳多糖产量检测 | 第39-40页 |
| 4.3.5 葡聚糖合成酶基因半定量检测 | 第40页 |
| 4.3.6 糙皮侧耳多糖红外光谱分析 | 第40-41页 |
| 4.4 结果与分析 | 第41-44页 |
| 4.4.1 转化子基因组DNA与RNA的提取 | 第41页 |
| 4.4.2 转化子的基因转化验证 | 第41-42页 |
| 4.4.3 糙皮侧耳多糖产量测定 | 第42-43页 |
| 4.4.4 糙皮侧耳葡聚糖合成酶基因半定量检测结果 | 第43-44页 |
| 4.4.5 糙皮侧耳多糖红外光谱分析结果 | 第44页 |
| 4.5 本章小结 | 第44-46页 |
| 5.结论与讨论 | 第46-48页 |
| 5.1 结论 | 第46页 |
| 5.1.1 同源重组片段的构建 | 第46页 |
| 5.1.2 脂质体转化糙皮侧耳菌丝 | 第46页 |
| 5.1.3 糙皮侧耳的同源重组 | 第46页 |
| 5.1.4 葡聚糖含量的提高 | 第46页 |
| 5.2 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 英文摘要 | 第53页 |