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应用启动子替换构建糙皮侧耳多糖高产菌株

致谢第4-9页
摘要第9-10页
1.文献综述第10-21页
    1.1 糙皮侧耳概述第10-11页
        1.1.1 糙皮侧耳分类和培养第10页
        1.1.2 糙皮侧耳的食药用价值第10-11页
        1.1.3 糙皮侧耳的经济价值第11页
    1.2 糙皮侧耳遗传转化研究进展第11-13页
        1.2.1 传统糙皮侧耳转化方法第11-12页
        1.2.2 电激转化法第12页
        1.2.3 基因枪法第12页
        1.2.4 限制酶介导的DNA整合法第12-13页
    1.3 启动子和筛选标记第13-14页
        1.3.1 糙皮侧耳基因启动子第13页
        1.3.2 筛选标记第13-14页
    1.4 基因片段连接方法概述第14-15页
        1.4.1 传统基因连接方式第14页
        1.4.2 重叠PCR快速连接基因片段第14-15页
    1.5 真菌多糖研究进展第15-17页
        1.5.1 真菌多糖的种类第15页
        1.5.2 真菌多糖的药用价值第15-16页
        1.5.3 真菌多糖的提取方法第16-17页
    1.6 构建糙皮侧耳多糖高产菌株意义第17-18页
    1.7 糙皮侧耳葡聚糖高产菌株构建方法第18-19页
    1.8 研究内容和技术路线第19-20页
    1.9 本章小结第20-21页
2.同源重组片段的构建第21-32页
    2.1 引言第21页
    2.2 实验材料第21-23页
        2.2.1 菌种和质粒第21页
        2.2.2 培养基配方第21页
        2.2.3 主要试剂第21-22页
        2.2.4 溶液配制第22页
        2.2.5 仪器第22-23页
    2.3 实验方法第23-28页
        2.3.1 糙皮侧耳天达300基因组总DNA的提取第23页
        2.3.2 同源重组序列构建引物的设计第23-26页
        2.3.3 GPD启动子的扩增第26页
        2.3.4 同源重组序列左右臂的扩增第26-27页
        2.3.5 hph抗性基因的扩增第27-28页
        2.3.6 第一个同源重组片段的连接第28页
        2.3.7 第二个同源重组片段的连接第28页
    2.4 结果与分析第28-30页
        2.4.1 糙皮侧耳天达300基因组DNA的提取第28-29页
        2.4.2 第一套引物扩增结果第29页
        2.4.3 第二套引物扩增结果第29页
        2.4.4 第一个同源重组片段的融合与测序第29-30页
        2.4.5 第二个同源重组片段的融合与测序第30页
    2.5 本章小结第30-32页
3.糙皮侧耳遗传转化体系及多糖高产菌株的构建第32-38页
    3.1 引言第32页
    3.2 实验材料第32页
        3.2.1 菌种第32页
        3.2.2 试剂与培养基第32页
    3.3 实验方法第32-34页
        3.3.1 原生质体转化法第32-33页
        3.3.2 脂质体转化法第33-34页
    3.4 结果与分析第34-36页
        3.4.1 原生质体制备第34-35页
        3.4.2 研磨转化适宜介质的筛选第35页
        3.4.3 转化子的初筛选第35-36页
        3.4.4 转化子的复筛第36页
    3.5 本章小结第36-38页
4.糙皮侧耳多糖高产菌株的筛选及验证第38-46页
    4.1 引言第38页
    4.2 实验材料第38页
        4.2.1 菌种第38页
        4.2.2 试剂与仪器第38页
    4.3 实验方法第38-41页
        4.3.1 转化子基因组DNA的提取第38页
        4.3.2 转化子基因组RNA的提取与反转录第38-39页
        4.3.3 转化子基因验证第39页
        4.3.4 糙皮侧耳多糖产量检测第39-40页
        4.3.5 葡聚糖合成酶基因半定量检测第40页
        4.3.6 糙皮侧耳多糖红外光谱分析第40-41页
    4.4 结果与分析第41-44页
        4.4.1 转化子基因组DNA与RNA的提取第41页
        4.4.2 转化子的基因转化验证第41-42页
        4.4.3 糙皮侧耳多糖产量测定第42-43页
        4.4.4 糙皮侧耳葡聚糖合成酶基因半定量检测结果第43-44页
        4.4.5 糙皮侧耳多糖红外光谱分析结果第44页
    4.5 本章小结第44-46页
5.结论与讨论第46-48页
    5.1 结论第46页
        5.1.1 同源重组片段的构建第46页
        5.1.2 脂质体转化糙皮侧耳菌丝第46页
        5.1.3 糙皮侧耳的同源重组第46页
        5.1.4 葡聚糖含量的提高第46页
    5.2 讨论第46-48页
参考文献第48-53页
英文摘要第53页

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