| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词英文对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 研究背景 | 第11-21页 |
| 1.1 牛病毒性腹泻病毒分子生物学特性研究进展 | 第11-18页 |
| 1.2 BVDV NS3研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 BVDV IRES的结构及功能 | 第20-21页 |
| 第二章 IRES双报告质粒的构建 | 第21-35页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 细胞、菌株、毒株及质粒 | 第21页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 仪器设备 | 第22页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.1 BVDV C24V病毒的培养及病毒滴度的测定 | 第24页 |
| 2.2 BVDV C24V病毒RNA的提取及反转录 | 第24-25页 |
| 2.3 双报告表达质粒的构建 | 第25-30页 |
| 2.5 重组质粒pcDNA3.1-CAT-IRES-GFP转染HEK293T细胞 | 第30页 |
| 2.6 Western-blot分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-33页 |
| 3.1 BVDV病毒毒价的测定 | 第31-32页 |
| 3.2 构建重组表达载体pcDNA3.1-CAT-IRES-GFP | 第32-33页 |
| 3.3 Western-blot分析 | 第33页 |
| 4 小结 | 第33-35页 |
| 第三章 BVDV NS3抗原表位的分析及原核表达 | 第35-46页 |
| 1 实验材料 | 第35页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第35页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第35页 |
| 1.3 仪器设备 | 第35页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.1 NS3蛋白抗原表位分析 | 第35-36页 |
| 2.2 NS3基因的克隆 | 第36-38页 |
| 2.3 原核表达载体pET-28a-his-NS3的构建 | 第38-39页 |
| 2.4 原核重组质粒pET-28a-his-NS3的诱导表达 | 第39页 |
| 2.5 Western-blot分析检测NS3蛋白抗原的特异性 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-45页 |
| 3.1 NS3蛋白抗原表位分析 | 第40-43页 |
| 3.2 pET-28a-his-NS3原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.3 重组质粒pET-28a-his-NS3的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.4 Western-blot分析NS3蛋白抗原性 | 第45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 NS3真核表达载体的构建 | 第46-50页 |
| 1 实验材料 | 第46页 |
| 1.1 细胞、菌株、及质粒 | 第46页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第46页 |
| 1.3 仪器设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-48页 |
| 2.1 NS3基因的克隆 | 第46页 |
| 2.2 真核表达质粒pEGFPC2-NS3的构建 | 第46-47页 |
| 2.3 Western-blot检测 | 第47-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-49页 |
| 3.1 重组质粒pEGFPC2-NS3的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2 Western-blot分析 | 第49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第五章 荧光素酶报告载体pGL6-IRES及分段表达载体的构建 | 第50-54页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| 1.1 质粒 | 第50页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第50页 |
| 1.3 仪器设备 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| 2.1 IRES基因组结构的分段 | 第50-51页 |
| 2.2 IRES分段基因的克隆 | 第51页 |
| 2.3 IRES及分段基因荧光素酶报告载体的构建 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-53页 |
| 3.1 IRES基因及分段基因A、B、C的PCR扩增 | 第52页 |
| 3.2 双荧光素酶重组质粒pGL6-A、pGL6-B、pGL6-C、pGL6-D的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 第六章 NS3对IRES介导的翻译的调控 | 第54-59页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| 1.1 质粒 | 第54页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第54页 |
| 1.3 仪器设备 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-55页 |
| 2.1 质粒转染 | 第54-55页 |
| 2.2 双荧光素酶报告实验 | 第55页 |
| 2.3 Western-blot分析 | 第55页 |
| 3 实验结果 | 第55-58页 |
| 3.1 NS3对IRES介导的翻译的调节作用 | 第55-56页 |
| 3.2 双荧光素酶报告检测系统确定NS3与IRES结合的功能结构域 | 第56-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 第七章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 1. 作者简介 | 第66页 |
| 2. 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第66页 |
| 3. 硕士期间参与的课题研究 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
