| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-40页 |
| 1 天然免疫概述 | 第16-24页 |
| 1.1 抗病毒免疫识别受体 | 第16-22页 |
| 1.1.1 TLR家族 | 第17-18页 |
| 1.1.2 RLR家族 | 第18-20页 |
| 1.1.3 HMGB家族 | 第20-22页 |
| 1.2 鱼类抗病毒天然免疫研究现状 | 第22-24页 |
| 1.2.1 TLR | 第22页 |
| 1.2.2 RLR | 第22-23页 |
| 1.2.3 HMGB | 第23-24页 |
| 2 自噬概述 | 第24-35页 |
| 2.1 自噬分类 | 第25-31页 |
| 2.1.1 大自噬 | 第25-28页 |
| 2.1.2 微自噬 | 第28-29页 |
| 2.1.3 CMA | 第29-31页 |
| 2.2 自噬调控 | 第31-32页 |
| 2.3 自噬与抗病毒天然免疫的关系 | 第32-35页 |
| 3 草鱼出血病及其免疫学研究进展 | 第35-38页 |
| 3.1 草鱼出血病研究历程 | 第35-37页 |
| 3.2 草鱼出血病防治策略 | 第37-38页 |
| 4 本研究问题的由来、目的和意义 | 第38-40页 |
| 第二章 在静息状态下或GCRV感染的早期LGP2对RIG-I和MDA5调节的抗病毒免疫应答发挥负调控作用 | 第40-77页 |
| 1 前言 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-53页 |
| 2.1 试验材料 | 第41-43页 |
| 2.1.1 试验试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.2 试验所需溶液配制 | 第42页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.1.4 病毒和细胞 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.2.1 DNA提取 | 第43-44页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.2.3 反转录 | 第45页 |
| 2.2.4 载体构建 | 第45-48页 |
| 2.2.5 细胞转染、筛选与病毒刺激 | 第48-50页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告试验 | 第50页 |
| 2.2.7 免疫印迹 | 第50-51页 |
| 2.2.8 Co-IP试验 | 第51-52页 |
| 2.2.9 RT-qPCR | 第52-53页 |
| 2.2.10 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰试验 | 第53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-73页 |
| 3.1 LGP2在IFN和NF-κB诱导过程中发挥负调控作用 | 第53-55页 |
| 3.2 在GCRV感染早期,LGP2过表达抑制IFN和NF-κB的表达水平 | 第55-57页 |
| 3.3 LGP2在病毒感染早期抑制IRF3和IRF7的合成和活化 | 第57-60页 |
| 3.4 在GCRV感染早期,敲降LGP2增强了抗病毒免疫应答反应 | 第60-62页 |
| 3.5 LGP2与RIG-I和MDA5相互作用 | 第62-64页 |
| 3.6 LGP2抑制RIG-I和MDA5调节的IPS-1和MITA的活化 | 第64-67页 |
| 3.7 LGP2能抑制RIG-I和MDA5K63连接的泛素化 | 第67-70页 |
| 3.8 LGP2在病毒感染早期抑制RIG-I和MDA5K48连接的泛素化 | 第70-72页 |
| 3.9 GCRV刺激引起了LGP2苏氨酸去磷酸化 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| 第三章 HMGB1b调节的抗病毒自噬依赖于HSP70 | 第77-109页 |
| 1 前言 | 第77-78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-84页 |
| 2.1 试验材料 | 第78-79页 |
| 2.1.1 病毒和细胞 | 第78页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第78页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第78-79页 |
| 2.2 实验方法 | 第79-84页 |
| 2.2.1 RNA提取 | 第79页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第79-81页 |
| 2.2.3 细胞转染、稳转细胞系筛选 | 第81页 |
| 2.2.4 病毒感染试验 | 第81页 |
| 2.2.5 液相色谱-串联质谱分析(LC-MS/MS) | 第81页 |
| 2.2.6 细胞活性测定 | 第81-82页 |
| 2.2.7 Co-IP和WB试验 | 第82页 |
| 2.2.8 病毒滴度检测 | 第82-83页 |
| 2.2.9 激光共聚焦试验 | 第83页 |
| 2.2.10 活细胞工作站观察 | 第83-84页 |
| 2.2.11 TEM观察 | 第84页 |
| 2.2.12 RT-qPCR | 第84页 |
| 3 结果与分析 | 第84-106页 |
| 3.1 GCRV感染引起HSP70与HMGB1b互作 | 第84-88页 |
| 3.2 HSP70促进H_2O_2引起的HMGB1b胞质转运 | 第88-90页 |
| 3.3 H_2O_2处理引起HSP70转运到细胞核并与HMGB1b互作 | 第90-91页 |
| 3.4 H_2O_2处理诱导CIK细胞发生自噬 | 第91-93页 |
| 3.5 GCRV通过诱导ROS的产生来促进自噬的活化 | 第93-97页 |
| 3.6 自噬抑制GCRV复制 | 第97-98页 |
| 3.7 HSP70和HMGB1b协同促进H_2O_2引起的自噬活化 | 第98-101页 |
| 3.8 草鱼Beclin1是一个重要的自噬调控基因 | 第101-103页 |
| 3.9 HSP70通过与Beclin1相互作用来促进HMGB1b-Beclin1互作以及自噬体的聚团 | 第103-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| 总结 | 第109-110页 |
| 论文的创新点和不足 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-135页 |
| 作者简历 | 第135-139页 |
| 致谢 | 第139-141页 |
