| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-33页 |
| 1 microRNAs概述 | 第12-18页 |
| 1.1 microRNAs简介 | 第12页 |
| 1.2 miRNA的生物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3 miRNAs在肌肉发育中的功能 | 第13-16页 |
| 1.4 miRNAs调节肝脏代谢 | 第16-17页 |
| 1.5 miR-203的功能研究 | 第17-18页 |
| 2 DMRT基因家族概述 | 第18-23页 |
| 2.1 DMRT基因的功能研究 | 第18-20页 |
| 2.1.1 参与性别决定与分化 | 第18-19页 |
| 2.1.2 参与早期胚胎发育及器官形成 | 第19-20页 |
| 2.2 Dmrt2基因的研究进展 | 第20-23页 |
| 3 肌肉发育概述 | 第23-26页 |
| 3.1 鱼类肌肉简介 | 第23页 |
| 3.2 肌肉发育相关基因的研究 | 第23-26页 |
| 4 IGF2BPs基因家族概述 | 第26-29页 |
| 4.1 IGF2BPs基因家族简介 | 第26-27页 |
| 4.2 IGF2BPs研究进展 | 第27-29页 |
| 5 肝脏发育概述 | 第29-31页 |
| 5.1 肝脏发育简介 | 第29页 |
| 5.2 肝脏发育相关基因的研究 | 第29-31页 |
| 6 实验动物斑马鱼的研究背景 | 第31页 |
| 7 研究目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 斑马鱼胚胎中miR-203靶向结合dmrt2a调节快肌的分化 | 第33-58页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-48页 |
| 2.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.2 所用载体 | 第34页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.4 实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.5 RNA抽提 | 第36-37页 |
| 2.6 RNA逆转录 | 第37-38页 |
| 2.6.1 通用引物法 | 第37-38页 |
| 2.6.2 Stem-loop法 | 第38页 |
| 2.7 荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.8 DNA纯化回收 | 第40-41页 |
| 2.9 质粒构建 | 第41-42页 |
| 2.10 双荧光素酶系统验证 | 第42页 |
| 2.11 体外转录合成dmrt2amRNA | 第42-43页 |
| 2.12 斑马鱼胚胎整体原位杂交(WISH) | 第43-47页 |
| 2.13 显微注射 | 第47-48页 |
| 2.14 数据分析 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-56页 |
| 3.1 敲降dmrt2a损害快肌发育并促进慢肌发育 | 第48-51页 |
| 3.2 Dmrt2a是miR-203的靶基因 | 第51-53页 |
| 3.3 miR-203a在斑马鱼胚胎中调节快肌的发育 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 igf2bp1在斑马鱼早期肝脏发育过程中是肝脏生长所必需的 | 第58-91页 |
| 1 前言 | 第58-59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-79页 |
| 2.1 实验动物 | 第59页 |
| 2.2 所用载体 | 第59页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第59-60页 |
| 2.4 实验试剂 | 第60-61页 |
| 2.5 斑马鱼基因组DNA提取 | 第61-62页 |
| 2.6 RNA抽提 | 第62页 |
| 2.7 RNA逆转录 | 第62-64页 |
| 2.7.1 通用引物法 | 第62-63页 |
| 2.7.2 Stem-loop法 | 第63-64页 |
| 2.8 荧光定量PCR | 第64-65页 |
| 2.9 DNA纯化回收 | 第65-66页 |
| 2.10 igf2bp1Morpholino特异性验证质粒构建 | 第66页 |
| 2.11 体外转录合成igf2bp1mRNA | 第66-67页 |
| 2.12 斑马鱼胚胎整体原位杂交(WISH) | 第67-71页 |
| 2.13 斑马鱼igf2bp1基因CRISPR/Cas9敲除系统构建 | 第71-74页 |
| 2.13.1 基因序列获取 | 第71页 |
| 2.13.2 igf2bp1基因CRISPR/Cas9靶位点设计 | 第71-72页 |
| 2.13.3 gRNA体外转录模板合成 | 第72-73页 |
| 2.13.4 体外转录合成Cas9mRNA | 第73-74页 |
| 2.13.5 体外转录合成gRNA | 第74页 |
| 2.14 显微注射 | 第74-75页 |
| 2.15 斑马鱼敲除igf2bp1靶位点有效性验证 | 第75-78页 |
| 2.16 斑马鱼igf2bp1F0代突变体筛选 | 第78页 |
| 2.17 斑马鱼igf2bp1F1代突变体筛选 | 第78页 |
| 2.18 斑马鱼igf2bp1F2纯合突变体筛选 | 第78-79页 |
| 2.19 差异基因筛选 | 第79页 |
| 2.20 Pathway 分析 | 第79页 |
| 2.21 数据分析 | 第79页 |
| 3 结果 | 第79-89页 |
| 3.1 igf2bp1在斑马鱼早期胚胎中的表达模式 | 第79-80页 |
| 3.2 miR-203a潜在结合igf2bp1 | 第80-81页 |
| 3.3 斑马鱼胚胎中敲降igf2bp1对斑马鱼形态及肌肉的发育没有影响 | 第81-84页 |
| 3.4 斑马鱼胚胎中敲降igf2bp1导致肝脏体积变小但不影响早期内胚层标记基因的表达 | 第84-85页 |
| 3.5 基因芯片结果分析 | 第85-86页 |
| 3.6 igf2bp1突变体斑马鱼的构建 | 第86-87页 |
| 3.7 igf2bp1突变体斑马鱼肝脏体积变小但不影响早期内胚层标记基因的表达 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-115页 |
| 附录 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
