| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-30页 |
| 1 花生果腐病研究进展 | 第18-20页 |
| 1.1 花生产业现状 | 第18页 |
| 1.2 花生土传病害 | 第18页 |
| 1.3 花生果腐病发病症状 | 第18-19页 |
| 1.4 花生果腐病致病真菌鉴定 | 第19页 |
| 1.5 花生果腐病防治 | 第19-20页 |
| 1.6 花生抗果腐病育种 | 第20页 |
| 2 土壤真菌多样性 | 第20-22页 |
| 2.1 土壤根际微生物 | 第20-21页 |
| 2.2 真菌在生态系统中的作用 | 第21页 |
| 2.3 真菌多样性 | 第21-22页 |
| 2.4 环境因素对真菌多样性的影响 | 第22页 |
| 3 RNA-seq测序的发展与应用 | 第22-25页 |
| 3.1 转录组测序的发展与应用 | 第22-23页 |
| 3.1.1 转录组测序概述 | 第22-23页 |
| 3.1.2 转录组测序的应用 | 第23页 |
| 3.2 植物miRNAs测序及应用 | 第23-25页 |
| 3.2.1 植物miRNA鉴定 | 第23-24页 |
| 3.2.2 植物靶基因的鉴定 | 第24页 |
| 3.2.3 miRNA与靶基因验证方法 | 第24页 |
| 3.2.4 植物miRNA在抗病反应中的作用 | 第24-25页 |
| 4 植物抗病研究进展 | 第25-29页 |
| 4.1 植物抗病机制 | 第25-26页 |
| 4.2 植物抗病与激素信号途径 | 第26-28页 |
| 4.2.1 IAA在植物抗病中的作用 | 第26页 |
| 4.2.2 SA在植物抗病中的作用 | 第26-27页 |
| 4.2.3 JA在植物抗病中的作用 | 第27页 |
| 4.2.4 JA、ET和SA在植物抗病中的互作 | 第27-28页 |
| 4.3 植物抗病基因类型 | 第28页 |
| 4.4 MAPKK基因家族简述 | 第28-29页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 花生果腐病病原真菌的分离 | 第30-51页 |
| 1 材料与方法 | 第30-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 1.1.1 花生种质资源 | 第30页 |
| 1.1.2 土壤材料 | 第30-31页 |
| 1.1.3 质粒和菌株 | 第31页 |
| 1.1.4 实验试剂 | 第31页 |
| 1.1.5 引物合成 | 第31页 |
| 1.1.6 真菌生物信息学分析软件 | 第31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 土壤真菌454FLX+测序及分析 | 第31-32页 |
| 1.2.1.1 土壤物化参数测定 | 第31-32页 |
| 1.2.1.2 真菌ITS区域高通量测序 | 第32页 |
| 1.2.1.3454 FLX+测序及数据分析 | 第32页 |
| 1.2.2 土壤真菌分离及ITS测序 | 第32-33页 |
| 1.2.3 花生果腐病真菌分离及ITS测序 | 第33页 |
| 1.2.4 致病菌接种花生幼苗及其离体组织 | 第33页 |
| 1.2.5 花生品种抗果腐病比较 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-47页 |
| 2.1 土壤样品获得及环境物化参数分析 | 第33-34页 |
| 2.2 454 FLX+测序结果分析 | 第34-36页 |
| 2.3 真菌群落组成分析 | 第36-38页 |
| 2.4 真菌群落相似性分析 | 第38-40页 |
| 2.5 真菌群落结构与花生品种和土壤理化因子的关联分析 | 第40-45页 |
| 2.6 花生果腐病土壤致病真菌的分离与序列分析 | 第45页 |
| 2.7 镰孢菌侵染花生幼苗和离体组织 | 第45页 |
| 2.8 花生抗病种质资源比较 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 3.1 真菌群落多样性丰富 | 第47页 |
| 3.2 不同分类水平上的真菌OTUs的群落组成不同 | 第47-48页 |
| 3.3 花生果腐病致病菌群落结构与花生品种、土壤环境因子都密切相关 | 第48-49页 |
| 3.4 莱西地区花生果腐病主效致病真菌为镰孢菌 | 第49页 |
| 4 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 花生响应果腐病病原菌侵染的转录组和小RNA测序分析 | 第51-76页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| 1.1 实验材料 | 第51页 |
| 1.1.1 花生种质资源 | 第51页 |
| 1.1.2 DNA生物信息学分析软件和网络资源及数据库 | 第51页 |
| 1.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 1.2.1 花生籽仁转录组测序与分析 | 第51-54页 |
| 1.2.1.1 转录组测序分析 | 第51-52页 |
| 1.2.1.2 荧光定量PCR检测 | 第52-54页 |
| 1.2.2 花生小RNA的测序与分析 | 第54-55页 |
| 1.2.2.1 小RNA的测序 | 第54页 |
| 1.2.2.2 miRNA荧光定量PCR检测 | 第54-55页 |
| 1.2.3 miRNA156靶标验证实验 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-70页 |
| 2.1 花生果腐病转录组数据分析 | 第56-65页 |
| 2.1.1 转录组测序数据统计与功能注释 | 第56-58页 |
| 2.1.2 表达差异基因筛选 | 第58-59页 |
| 2.1.3 荧光定量PCR检测 | 第59-60页 |
| 2.1.4 差异表达基因的GO分析 | 第60-61页 |
| 2.1.5 差异表达基因的KEGG途径分析 | 第61-65页 |
| 2.2 花生果腐病抗性相关miRNAs挖掘 | 第65-70页 |
| 2.2.1 测序数据及过滤统计 | 第65-66页 |
| 2.2.2 miRNA的注释与差异表达分析 | 第66-67页 |
| 2.2.3 差异表达miRNAs靶基因的预测和功能注释 | 第67-68页 |
| 2.2.4 转录组和miRNA测序共有的差异表达基因分析 | 第68页 |
| 2.2.5 qRT-PCR验证测序结果准确性 | 第68-69页 |
| 2.2.6 预测ahy-miRNA156与基因c40790_g1_i2靶标位点的PCR验证 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-75页 |
| 3.1 花生果腐病转录组测序结果可靠 | 第71-72页 |
| 3.2 花生可能通过JA/ET介导的信号途径参与抗果腐病过程 | 第72-73页 |
| 3.3 多个抗病相关基因家族参与花生抗病过程 | 第73页 |
| 3.4 多个miRNAs参与花生抗病过程 | 第73-74页 |
| 3.5 花生果腐病抗性相关miRNAs和靶基因预测存在假阳性 | 第74-75页 |
| 4 小结 | 第75-76页 |
| 第四章 花生AhMKK4基因的克隆与功能分析 | 第76-94页 |
| 1 材料与方法 | 第76-82页 |
| 1.1 实验材料 | 第76-77页 |
| 1.1.1 花生种质资源 | 第76页 |
| 1.1.2 拟南芥和烟草材料 | 第76页 |
| 1.1.3 质粒和菌株 | 第76页 |
| 1.1.4 工具酶及主要实验试剂 | 第76-77页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第77页 |
| 1.1.6 引物合成 | 第77页 |
| 1.1.7 DNA生物信息学分析软件和网络资源及数据库 | 第77页 |
| 1.2 实验方法 | 第77-82页 |
| 1.2.1 花生材料处理 | 第77-78页 |
| 1.2.2 AhMKK4基因的筛选与克隆 | 第78页 |
| 1.2.3 荧光定量PCR分析 | 第78-80页 |
| 1.2.4 植物表达载体的构建 | 第80页 |
| 1.2.5 农杆菌感受态细胞制备及重组质粒转化根癌农杆菌 | 第80-81页 |
| 1.2.6 烟草叶片瞬时表达及亚细胞定位分析 | 第81页 |
| 1.2.7 农杆菌介导的拟南芥花序转化 | 第81页 |
| 1.2.8 转基因拟南芥种子的筛选及RT-PCR检测 | 第81-82页 |
| 1.2.9 转基因拟南芥在非生物胁迫下的抗性分析 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-91页 |
| 2.1 AhMKK4基因的克隆 | 第82-83页 |
| 2.2 AhMKK4基因编码的蛋白序列分析 | 第83-87页 |
| 2.3 AhMKK4基因的组织特异性和品种特异性分析 | 第87页 |
| 2.4 AhMKK4基因的非生物胁迫和激素诱导下的表达分析 | 第87-89页 |
| 2.5 AhMKK4蛋白亚细胞定位 | 第89页 |
| 2.6 AhMKK4基因表达载体的构建 | 第89页 |
| 2.7 AhMKK4基因在拟南芥中的遗传转化及鉴定 | 第89-91页 |
| 2.8 转基因拟南芥在非生物胁迫条件下的抗性分析 | 第91页 |
| 3 讨论 | 第91-93页 |
| 3.1 AhMKK4基因的序列与其他植物中的同源序列有较高的相似性 | 第91-92页 |
| 3.2 AhMKK4定位于细胞质和细胞核中 | 第92页 |
| 3.3 AhMKK4的表达受多种环境胁迫及信号分子的诱导 | 第92-93页 |
| 3.4 AhMKK4的超表达转基因拟南芥不具有盐、渗透等胁迫抗性 | 第93页 |
| 4 小结 | 第93-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第105页 |
