| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 1 引言 | 第17-37页 |
| 1.1 植物应对环境胁迫的分子机制 | 第17-24页 |
| 1.1.1 生物胁迫响应机制 | 第17-21页 |
| 1.1.1.1 植物固有免疫机制 | 第17-20页 |
| 1.1.1.2 植物系统获得性免疫机制 | 第20-21页 |
| 1.1.2 非生物胁迫响应机制 | 第21-24页 |
| 1.1.2.1 干旱胁迫响应机制 | 第21-22页 |
| 1.1.2.2 盐胁迫响应机制 | 第22-24页 |
| 1.2 非特异性脂转移蛋白家族 | 第24-25页 |
| 1.2.1 非特异性脂转移蛋白家族的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.2.2 非特异性脂转移蛋白的结构 | 第25页 |
| 1.3 非特异性脂转移蛋白的生物学功能 | 第25-29页 |
| 1.3.1 非特异性脂转移蛋白活性 | 第25-26页 |
| 1.3.2 非特异性脂转移蛋白参与生物胁迫响应 | 第26-28页 |
| 1.3.3 非特异性脂转移蛋白参与非生物胁迫响应 | 第28-29页 |
| 1.3.4 非特异性脂转移蛋白参与多种代谢过程 | 第29页 |
| 1.4 MAPK级联信号通路 | 第29-30页 |
| 1.4.1 植物体内的MAPK级联途径 | 第29-30页 |
| 1.5 MAPK级联信号通路的生物学功能 | 第30-36页 |
| 1.5.1 MAPK在生物胁迫中的作用 | 第30-32页 |
| 1.5.2 MAPKs在非生物胁迫中的作用 | 第32-34页 |
| 1.5.3 MAPK在激素信号中的作用 | 第34-35页 |
| 1.5.4 MAPK调控植物的生长发育 | 第35-36页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-41页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第37页 |
| 2.1.3 各种生化试剂 | 第37页 |
| 2.1.4 生物信息学相关网站 | 第37-38页 |
| 2.1.5 实验设计所用引物 | 第38-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-66页 |
| 2.2.1 诱导表达模式分析 | 第41页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第42页 |
| 2.2.4 CTAB法提取植物基因组 | 第42-43页 |
| 2.2.5 转录水平检测 | 第43-44页 |
| 2.2.5.1 半定量RT-PCR(SemiquantitativeRT-PCR) | 第43页 |
| 2.2.5.2 实时荧光定量PCR(Real-timequantitativePCR,qRT-PCR) | 第43-44页 |
| 2.2.6 载体构建 | 第44-48页 |
| 2.2.6.1 目的基因PCR扩增 | 第44-45页 |
| 2.2.6.2 PCR扩增片段的回收 | 第45页 |
| 2.2.6.3 目的基因连接克隆载体 | 第45-46页 |
| 2.2.6.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 2.2.6.5 大肠杆菌感受态细胞的转化过程 | 第46页 |
| 2.2.6.6 菌液PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 2.2.6.7 质粒DNA的微量提取 | 第47页 |
| 2.2.6.8 酶切鉴定和回收 | 第47-48页 |
| 2.2.6.9 表达载体的构建 | 第48页 |
| 2.2.7 表达载体的农杆菌转化 | 第48-49页 |
| 2.2.7.1 根癌农杆菌GV3101和LBA4404感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| 2.2.7.2 冻融法转化农杆菌 | 第49页 |
| 2.2.7.3 电转法转化农杆菌 | 第49页 |
| 2.2.8 亚细胞定位分析 | 第49-51页 |
| 2.2.8.1 瞬时转化本生烟 | 第49-50页 |
| 2.2.8.2 瞬时转化洋葱表皮细胞 | 第50页 |
| 2.2.8.3 双光子共聚焦显微镜操作流程 | 第50-51页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的叶盘法转化普通烟 | 第51-52页 |
| 2.2.10 转基因烟草鉴定 | 第52页 |
| 2.2.11 转基因烟草的非生物胁迫处理 | 第52-53页 |
| 2.2.12 转基因烟草的生物胁迫处理 | 第53页 |
| 2.2.13 植物体内离子含量的测定 | 第53-54页 |
| 2.2.13.1 Na~+探针荧光染色方法 | 第53-54页 |
| 2.2.13.2 火焰原子吸收法 | 第54页 |
| 2.2.14 组织化学染色方法 | 第54-55页 |
| 2.2.15 生理活性物质检测 | 第55页 |
| 2.2.16 气孔开度检测 | 第55-56页 |
| 2.2.17 酵母感受态细胞的制备与转化 | 第56-57页 |
| 2.2.17.1 醋酸锂(LiAc)法制备酵母感受态细胞 | 第56页 |
| 2.2.17.2 酵母感受态转化方法 | 第56-57页 |
| 2.2.18 酵母双杂筛选烟草cDNA文库 | 第57-59页 |
| 2.2.18.1 Matting法融合文库宿主菌和诱饵菌株 | 第57-58页 |
| 2.2.18.2 筛选互作蛋白 | 第58页 |
| 2.2.18.3 酵母DNA的提取 | 第58-59页 |
| 2.2.19 免疫共沉淀(co-IP) | 第59-64页 |
| 2.2.19.1 蛋白提取 | 第59-61页 |
| 2.2.19.2 试剂配制 | 第61-62页 |
| 2.2.19.3 蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳 | 第62-63页 |
| 2.2.19.4 湿法蛋白转移 | 第63-64页 |
| 2.2.19.5 免疫反应及化学发光法检测蛋白含量 | 第64页 |
| 2.2.20 双分子荧光互补实验(BIFC)和荧光素酶互补实验(LCI) | 第64-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-92页 |
| 3.1 NtLTP4响应多种非生物和生物胁迫 | 第66-67页 |
| 3.2 NtLTP4是一种分泌小蛋白,并定位于细胞外基质 | 第67-69页 |
| 3.3 过表达NtLTP4提高了转基因烟草植株对非生物胁迫的抗性 | 第69-72页 |
| 3.3.1 NtLTP4RNAi株系的获得 | 第69页 |
| 3.3.2 NtLTP4正调控盐胁迫和干旱胁迫 | 第69-72页 |
| 3.4 NtLTP4增强酵母菌株对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性 | 第72-73页 |
| 3.5 NtLTP4能有效维持植物体内的Na~+稳态 | 第73-76页 |
| 3.5.1 NtLTP4抑制植物体过度积累Na~+ | 第73-75页 |
| 3.5.2 NtLTP4通过调控HKT1和NHX1提高对Na~+的清除 | 第75-76页 |
| 3.6 NtLTP4过表达植株提高了对青枯菌的抗性 | 第76-81页 |
| 3.6.1 NtLTP4降低青枯菌的发病率 | 第76页 |
| 3.6.2 NtLTP4通过增强抗病相关基因的表达提高对青枯菌的抗性 | 第76-77页 |
| 3.6.3 NtLTP4能降低植物细胞的过氧化现象 | 第77-80页 |
| 3.6.4 NtLTP4调控气孔开度 | 第80-81页 |
| 3.7 NtLTP4与WIPK互作 | 第81-84页 |
| 3.8 WIPK在植物的抗病防御过程中起正调控作用 | 第84-85页 |
| 3.9 NtLTP4位于WIPK下游,并与其协同参与抗病防御 | 第85-89页 |
| 3.9.1 NtLTP4位于WIPK信号下游 | 第85-88页 |
| 3.9.2 WIPK维持了NtLTP4的蛋白稳定性 | 第88-89页 |
| 3.10 NPK1-NtMEK2-WIPK-NtLTP4信号通路参与植物的抗病防御过程 | 第89-92页 |
| 4 讨论 | 第92-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第116页 |
