| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1.氨酰tRNA合成酶 | 第11-14页 |
| 1.1 氨酰tRNA合成酶的功能 | 第11-12页 |
| 1.2 氨酰tRNA合成酶的分类与进化 | 第12-14页 |
| 2.氨酰tRNA合成酶多酶复合体 | 第14-16页 |
| 3.氨酰tRNA合成酶与疾病的联系 | 第16-17页 |
| 4.谷氨酰胺tRNA合成酶 | 第17-19页 |
| 5.研究内容与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-34页 |
| 1.实验材料 | 第20-21页 |
| 1.1 细胞,菌种,质粒及蛋白 | 第20页 |
| 1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.常用实验方法 | 第21-33页 |
| 2.1 菌株复苏与保存 | 第21-22页 |
| 2.2 DH5α和Rosetta感受态细胞制备 | 第22页 |
| 2.3 基因扩增和载体构建相关实验 | 第22-24页 |
| 2.4 重组质粒的转化 | 第24-25页 |
| 2.5 质粒抽提 | 第25页 |
| 2.6 切胶回收纯化 | 第25-26页 |
| 2.7 质粒浓缩 | 第26页 |
| 2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.9 基因测序 | 第26页 |
| 2.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第26-27页 |
| 2.11 目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第27-28页 |
| 2.12 包涵体蛋白的变复性和纯化 | 第28页 |
| 2.13 细胞的复苏与冻存 | 第28页 |
| 2.14 细胞传代 | 第28-29页 |
| 2.15 细胞转染与收集 | 第29-30页 |
| 2.16 激光共聚焦制片 | 第30页 |
| 2.17 免疫共沉淀 | 第30页 |
| 2.18 蛋白银染 | 第30-31页 |
| 2.19 质谱分析 | 第31-32页 |
| 2.20 westernblot检测 | 第32页 |
| 2.21 GST-pulldown | 第32-33页 |
| 3.主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 第三章 QRS-C13特异结合蛋白的筛选 | 第34-41页 |
| 1.实验材料 | 第34页 |
| 2.试验方法 | 第34-35页 |
| 2.1 真核表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.2 免疫共沉淀 | 第34-35页 |
| 2.3 质谱鉴定与分析 | 第35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-38页 |
| 3.1 PCR扩增pIRESpuro2-QRS-C13 | 第35页 |
| 3.2 免疫共沉淀分离QRS-C13结合蛋白 | 第35-36页 |
| 3.3 质谱鉴定和分析 | 第36-38页 |
| 4.讨论与小结 | 第38-41页 |
| 第四章 QRS-C13相互作用蛋白的鉴定 | 第41-53页 |
| 1.实验材料 | 第41页 |
| 2.实验方法 | 第41-42页 |
| 2.1 重组质粒的构建 | 第41页 |
| 2.2 目的蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| 2.3 目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 2.4 目的蛋白的验证 | 第42页 |
| 2.5 蛋白体外相互作用验证 | 第42页 |
| 3.结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.1 表达载体pET20b-QRS-C13与pGEx-4T-2-eIF3L的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 QRS-C13,eIF3L,LRS蛋白表达与纯化 | 第43-47页 |
| 3.3 细胞内QRS-C13与eIF3L之间相互作用的验证 | 第47-48页 |
| 3.4 体外GST-pulldown验证蛋白相互作用 | 第48-51页 |
| 4.讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 QRS-C13结合蛋白的细胞定位 | 第53-62页 |
| 1.试验材料 | 第53页 |
| 2.试验方法 | 第53-54页 |
| 2.1 pEGFP-N1-QRS-C13,pDsRed2-N1-eIF3L质粒构建 | 第53页 |
| 2.2 目的蛋白的结构预测与分析 | 第53-54页 |
| 2.3 激光共聚焦观察显微镜观察细胞定位 | 第54页 |
| 3.实验结果 | 第54-60页 |
| 3.1 QRS-C13结构预测与分析 | 第54-55页 |
| 3.2 重组质粒pEGFP-N1-QRS-C13,pDsRed2-N1-eIF3L的构建 | 第55-57页 |
| 3.3 激光共聚焦显微镜观察QRS-C13与QRS的细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.4 激光共聚焦显微镜观察QRS-C13与eIFL的细胞定位 | 第58-60页 |
| 4.讨论与小结 | 第60-62页 |
| 第六章 总结与展望 | 第62-64页 |
| 1.总结 | 第62-63页 |
| 2.展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 研究生期间科研成果 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
