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基于iTRAQ蛋白质组分析烟草对TMV感染耐受性的机制

致谢第4-8页
摘要第8-9页
1 文献综述第9-18页
    1.1 烟草普通花叶病毒研究进展第9-10页
        1.1.1 TMV简介第9页
        1.1.2 TMV的侵染循环第9-10页
        1.1.3 TMV的发病症状第10页
    1.2 烟草花叶病毒防治研究进展第10-12页
        1.2.1 选育、推广应用抗病烟草品种第10-11页
        1.2.2 通过烟草栽培管理防治烟草花叶病第11页
        1.2.3 利用化学药剂或抗病毒制剂防治烟草花叶病第11页
        1.2.4 利用微量元素等防治烟草花叶病第11页
        1.2.5 利用基因工程技术防治烟草花叶病第11-12页
    1.3 植物抗病毒侵染的分子机制第12-14页
        1.3.1 植物抑制病毒增殖的分子机制第12-13页
            1.3.1.1 植物抑制病毒胞内增殖的隐性抗病机制第12页
            1.3.1.2 植物抑制病毒胞内复制的显性抗病机制第12页
            1.3.1.3 植物内膜系统与病毒的胞内复制第12-13页
        1.3.2 植物阻止病毒移动的分子机制第13-14页
            1.3.2.1 植物阻止病毒胞间移动的隐性抗病机制第13页
            1.3.2.2 植物阻止病毒胞间移动的显性抗病机制第13页
            1.3.2.3 植物阻止病毒长距离移动的抗性机制第13-14页
        1.3.3 RNA沉默介导的植物抗病毒机制第14页
    1.4 蛋白质组学在植物-病原菌互作研究中的应用第14-18页
        1.4.1 定量蛋白质组学研究技术第14-16页
            1.4.1.1 基于凝胶电泳的蛋白质组学定量第14-15页
            1.4.1.2 基于同位素标记的蛋白质组学定量第15-16页
            1.4.1.3 非标记蛋白质定量第16页
        1.4.2 植物-病原菌(非病毒) 互作蛋白质组研究第16-17页
        1.4.3 植物-病原菌(病毒) 互作蛋白质组研究第17-18页
2 引言第18-19页
3 材料与方法第19-28页
    3.1 材料、试剂与仪器第19页
        3.1.1 实验材料第19页
        3.1.2 实验试剂第19页
        3.1.3 主要仪器第19页
    3.2 实验方法第19-28页
        3.2.1 样品处理及收集第19-20页
            3.2.1.1 病毒源提取第19-20页
            3.2.1.2 接种病毒第20页
            3.2.1.3 取样第20页
        3.2.2 蛋白质样品制备第20-21页
        3.2.3 样品前处理及i TRAQ标记第21页
        3.2.4 半制备型HPLC分离肽段第21-22页
        3.2.5 C18反相色谱柱除盐第22页
        3.2.6 Nano-LC分离肽段及质谱鉴定第22-23页
            3.2.6.1 Nano-LC分离肽段第22-23页
            3.2.6.2 质谱鉴定第23页
        3.2.7 生物信息学分析第23-24页
        3.2.8 western blot第24-25页
            3.2.8.1 蛋白样品制备及定量第24页
            3.2.8.2 SDS-PAGE电泳第24-25页
            3.2.8.3 转膜第25页
            3.2.8.4 免疫反应第25页
            3.2.8.5 显色DAB按照说明书进行操作。第25页
        3.2.9 相关基因定量分析第25-27页
            3.2.9.1 总RNA的提取及m RNA的反转录第25-26页
            3.2.9.2 实时荧光定量PCR第26-27页
        3.2.10 POD和CAT酶活性测定第27-28页
            3.2.10.1 过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性的测定第27页
            3.2.10.2 过氧化氢酶(catalase,CAT)活性的测定第27-28页
            3.2.10.3 样品可溶性蛋白含量的测定第28页
4 结果与分析第28-38页
    4.1 蛋白浓度的测定及质量检测第28-29页
    4.2 蛋白质定性分析第29页
    4.3 豫烟8号和NC89接种TMV前后差异表达蛋白鉴定与功能分析第29-31页
    4.4 防御响应TMV蛋白筛选第31-34页
    4.5 豫烟8号和NC89接种TMV前后光合作用途径差异表达蛋白质比较分析第34-36页
    4.6 Western blotting第36页
    4.7 POD和CAT酶活性分析第36-37页
    4.8 差异表达蛋白质的转录水平分析第37-38页
5 讨论第38-41页
    5.1 光合作用系统第38页
    5.2 磷酸戊糖途径及TCA循环第38-39页
    5.3 细胞氧化平衡及木质素合成第39页
    5.4 抗性蛋白表达第39-41页
6 结论第41-42页
参考文献第42-49页
ABSTRACT第49-50页
附录 不同区域差异表达蛋白第51-74页

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