致谢 | 第4-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
1 文献综述 | 第9-18页 |
1.1 烟草普通花叶病毒研究进展 | 第9-10页 |
1.1.1 TMV简介 | 第9页 |
1.1.2 TMV的侵染循环 | 第9-10页 |
1.1.3 TMV的发病症状 | 第10页 |
1.2 烟草花叶病毒防治研究进展 | 第10-12页 |
1.2.1 选育、推广应用抗病烟草品种 | 第10-11页 |
1.2.2 通过烟草栽培管理防治烟草花叶病 | 第11页 |
1.2.3 利用化学药剂或抗病毒制剂防治烟草花叶病 | 第11页 |
1.2.4 利用微量元素等防治烟草花叶病 | 第11页 |
1.2.5 利用基因工程技术防治烟草花叶病 | 第11-12页 |
1.3 植物抗病毒侵染的分子机制 | 第12-14页 |
1.3.1 植物抑制病毒增殖的分子机制 | 第12-13页 |
1.3.1.1 植物抑制病毒胞内增殖的隐性抗病机制 | 第12页 |
1.3.1.2 植物抑制病毒胞内复制的显性抗病机制 | 第12页 |
1.3.1.3 植物内膜系统与病毒的胞内复制 | 第12-13页 |
1.3.2 植物阻止病毒移动的分子机制 | 第13-14页 |
1.3.2.1 植物阻止病毒胞间移动的隐性抗病机制 | 第13页 |
1.3.2.2 植物阻止病毒胞间移动的显性抗病机制 | 第13页 |
1.3.2.3 植物阻止病毒长距离移动的抗性机制 | 第13-14页 |
1.3.3 RNA沉默介导的植物抗病毒机制 | 第14页 |
1.4 蛋白质组学在植物-病原菌互作研究中的应用 | 第14-18页 |
1.4.1 定量蛋白质组学研究技术 | 第14-16页 |
1.4.1.1 基于凝胶电泳的蛋白质组学定量 | 第14-15页 |
1.4.1.2 基于同位素标记的蛋白质组学定量 | 第15-16页 |
1.4.1.3 非标记蛋白质定量 | 第16页 |
1.4.2 植物-病原菌(非病毒) 互作蛋白质组研究 | 第16-17页 |
1.4.3 植物-病原菌(病毒) 互作蛋白质组研究 | 第17-18页 |
2 引言 | 第18-19页 |
3 材料与方法 | 第19-28页 |
3.1 材料、试剂与仪器 | 第19页 |
3.1.1 实验材料 | 第19页 |
3.1.2 实验试剂 | 第19页 |
3.1.3 主要仪器 | 第19页 |
3.2 实验方法 | 第19-28页 |
3.2.1 样品处理及收集 | 第19-20页 |
3.2.1.1 病毒源提取 | 第19-20页 |
3.2.1.2 接种病毒 | 第20页 |
3.2.1.3 取样 | 第20页 |
3.2.2 蛋白质样品制备 | 第20-21页 |
3.2.3 样品前处理及i TRAQ标记 | 第21页 |
3.2.4 半制备型HPLC分离肽段 | 第21-22页 |
3.2.5 C18反相色谱柱除盐 | 第22页 |
3.2.6 Nano-LC分离肽段及质谱鉴定 | 第22-23页 |
3.2.6.1 Nano-LC分离肽段 | 第22-23页 |
3.2.6.2 质谱鉴定 | 第23页 |
3.2.7 生物信息学分析 | 第23-24页 |
3.2.8 western blot | 第24-25页 |
3.2.8.1 蛋白样品制备及定量 | 第24页 |
3.2.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
3.2.8.3 转膜 | 第25页 |
3.2.8.4 免疫反应 | 第25页 |
3.2.8.5 显色DAB按照说明书进行操作。 | 第25页 |
3.2.9 相关基因定量分析 | 第25-27页 |
3.2.9.1 总RNA的提取及m RNA的反转录 | 第25-26页 |
3.2.9.2 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
3.2.10 POD和CAT酶活性测定 | 第27-28页 |
3.2.10.1 过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性的测定 | 第27页 |
3.2.10.2 过氧化氢酶(catalase,CAT)活性的测定 | 第27-28页 |
3.2.10.3 样品可溶性蛋白含量的测定 | 第28页 |
4 结果与分析 | 第28-38页 |
4.1 蛋白浓度的测定及质量检测 | 第28-29页 |
4.2 蛋白质定性分析 | 第29页 |
4.3 豫烟8号和NC89接种TMV前后差异表达蛋白鉴定与功能分析 | 第29-31页 |
4.4 防御响应TMV蛋白筛选 | 第31-34页 |
4.5 豫烟8号和NC89接种TMV前后光合作用途径差异表达蛋白质比较分析 | 第34-36页 |
4.6 Western blotting | 第36页 |
4.7 POD和CAT酶活性分析 | 第36-37页 |
4.8 差异表达蛋白质的转录水平分析 | 第37-38页 |
5 讨论 | 第38-41页 |
5.1 光合作用系统 | 第38页 |
5.2 磷酸戊糖途径及TCA循环 | 第38-39页 |
5.3 细胞氧化平衡及木质素合成 | 第39页 |
5.4 抗性蛋白表达 | 第39-41页 |
6 结论 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-49页 |
ABSTRACT | 第49-50页 |
附录 不同区域差异表达蛋白 | 第51-74页 |